手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

两种导致中国人地中海贫血的新突变基因的鉴定

贾世奇

  背景和目的地中海贫血(地贫)是一种珠蛋白链合成比例失衡的单基因遗传病,据受损珠蛋白的不同分为α地贫和β地贫两大类。均呈常染色体隐性遗传,α地贫主要由发生于16号染色体短臂末端α珠蛋白基因簇内包含α基因在内的缺失引起,少数由点突变引起,β地贫主要由发生于位于11号染色体短臂的β基因内的点突变引起。世界范围内地贫分布于热带、亚热带地区,并且地贫基因类型存在地域差异,如地中海沿岸国家α地贫以-α~(3.7)/αα、—~(MED)/αα为主,而东南亚国家以—~(SEA)/αα、-α~(3.7)/αα、-α~(4.2)/αα为主。在我国,地贫多发生于长江以南地区,尤其以广东、广西、海南为高发,α地贫基因型以缺失型突变—~(SEA)/αα、-α~(3.7)/αα、-α~(4.2)/αα为主,点突变α~(CS)/αα、α~(QS)α/αα也比较常见,β地贫突变类型以CD41/42(-TCTT)、IVS-2-654(C→T)、-28(A→G)、CD71/72(+A)、β~E:CD26(G→A)、CD17(A→T)最为常见。同时一些罕见的突变基因如α地贫基因-α~(2.7)/ααβ地贫基因CD37 TGG→TGA不断被报道,这些罕见突变基因类型是对常见突变的充实和必要补充,对于了解一个地区的地贫基因突变谱,建立可信的地贫基因诊断技术具有重要意义。对罕见突变基因的鉴定,不断完善对地贫基因谱的认识将是一项长期而连续的工作,需要机遇、职业敏感和不懈的努力。导致地贫的罕见突变基因的鉴定主要有2个来源。一是来源于临床病人,二是来源于大人群地贫基因筛查。最近,在我们进行的广东省5个中心城市α、β地贫流行病调查和四会市α、β地贫现场调查的基础上,获得若干具有α或β地贫临床表型但采用针对中国人常见地贫类型的基因诊断未发现突变的样本,我们对这些样本进行了突变的鉴定和mRNA表达水平的研究。设计和方法采用整群抽样的方法,对5605例脐血样本和7792例婚检样本进行血液学表型分析结合中国人中常见的a、p地贫基因筛查的流行病学调查基础上,获得血液学表型呈小细胞低色素,HbAZ增高(p地贫)或降低(a地贫)而没有已知地贫基因型改变的样本,包括4例a地贫待确诊样本和5例p地贫待确诊样本。对于a地贫待确诊样本,采取al、a2基因测序筛查未知的点突变,采用针对罕见缺失类型的gap一PCR、southem blot和跨断裂点测序的方法筛查大片段缺失和确定精确的断裂位点。对于p地贫待确诊样本,采用p珠蛋白基因全长测序的方法,筛查未知点突变。通过上述方法鉴定的新的突变基因采用RT~PCR方法研究突变对珠蛋白基因功能的影响。结果和讨论获得了一种新的缺失n.lkb包括al、a2基因在内的a地贫基因和一种在中国人群中首次发现的位于p珠蛋白基因启动子区一90位的C今T突变基因,并在GeneBank注册,注册号分别为:AY342392、AY26o74o。盯一PCR显示携带缺失11一kb的a突变基因的患者其a基因mRNA表达水平与基因型为一sEA厄a患者相当,而明显低于正常对照组;携带一90突变的p地贫患者其p珠蛋白基因mRNA表达水平明显降低。此外,我们还获得了al珠蛋白基因密码子118位+TCA插入突变,并注册(GeneBank AeeessionAY261678);在中国大陆首次发现了一TllAI/aa地贫类型。这些突变基因的发现丰富了地中海贫血的基因类型,加深了对中国人群中地贫类型的认识,为基因诊断提供了必要的分子基础,同时为中国人群地贫基因的分子进化机制的研究提供了参考。……   
[关键词]:α地中海贫血新突变基因;β地中海贫血新突变基因;DNA测序;Southern Blot;RT-PCR;基因诊断
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第一军医大学2004年