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扇贝多肽对UVB损伤的角质形成细胞的抗氧化和抗凋亡作用

黄绵庆

  实验目的以强度为103mJ/cm~2的UVB照射昆明种无毛小鼠皮肤建立动物损伤模型,以强度为30mJ/cm~2的UVB照射HaCaT细胞建立细胞损伤模型。在此基础上研究PCF(扇贝多肽)在UVB损伤角质形成细胞中的抗氧化和抗凋亡作用。实验方法动物实验的设计分5组:对照组、UVB模型组、UVB+5% PCF组、UVB+20%PCF组、UVB+10%VC组。无毛小鼠背部皮肤分别给药1小时后接受103mJ/cm~2UVB照射。以免疫组化检测皮肤角质形成细胞p53蛋白、P物质、EGFR(表皮生长因子受体)和真皮的Ⅰ、Ⅳ型胶原。细胞实验设计分为7组:对照组、UVB模型组、UVB+0.0625%PCF组、UVB+0.125%PCF组、UVB+0.25%PCF组、UVB+0.5%PCF组、UVB+0.1%VC组。HaCaT细胞与PCF或VC孵育1小时后,接受30mJ/cm~2UVB照射。除彗星电泳外,以下实验均于照射后18小时进行:以MTT法评价PCF对细胞生存率的影响;酶化学法测定细胞中的SOD(超氧化物歧化酶)、GSH-PX(谷胱甘肽过氧化物酶)、CAT(过氧化氢酶)、T-AOC(总抗氧化能力)和MDA(丙二醛);以流式细胞术检测细胞的凋亡率、线粒体膜电位和细胞内游离钙离子浓度;透射电镜观察细胞的超微结构;原位杂交实验检测细胞内p21 mRNA。实验结果免疫组化实验揭示了无毛小鼠的皮肤受UVB辐射后,其角质形成细胞表达的p53蛋白增多(P<0.01);以5%、20%的PCF和10%VC预处理的小鼠皮肤再接受UVB辐射后,其角质形成细胞表达的p53蛋白比模型组少(P<0.05);其中20%PCF抑制p53蛋白表达的效果优于5%PCF,具有统计学意义。103mJ/cm~2的UVB辐射诱导小鼠的真皮层表达大量的Ⅰ型胶原(P<0.01),并且杂乱地分布其中。与模型组相比,预先涂以PCF和VC的小鼠皮肤受UVB辐射后,真皮层表达的Ⅰ型胶原减少。PCF的处理使UVB辐射的真皮形态结构更接近正常。然而实验中单次UVB损伤没有改变皮肤的P物质、EGFR和Ⅳ型胶原。PCF能提高UVB损伤的HaCaT细胞内抗氧化酶SOD、GSH-PX、CAT的活性(P<0.05),增加总抗氧化能力(P<0.05),减少脂质过氧化产物MDA的含量(P<0.05)。流式细胞术的结果表明PCF在中文摘要。.0625%一0.5%范围内剂量依赖性降低UVB诱导的HaCaT细胞的凋亡率(尸<0.01)。同时PCF剂量依赖性减少细胞内游离钙离子和抑制线粒体膜电位的丧失(尸<0.01)。通过透射电镜观察细胞超微结构显示模型组HaCaT细胞的胞浆有大量空泡状结构,并堆积许多髓样小体。胞桨内的粗面内质网、高尔基复合体、线粒体等细胞器明显减少,三分之一左右的细胞核染色质成块并聚集于核周,表现出凋亡的形态学特征。PCF处理的HaCaT细胞的超微结构损伤程度明显减轻,如胞浆内更少的空泡样结构和更多形态正常的细胞器,少见具有凋亡形态的细胞,未见凋亡小体等。在彗星电泳中照射UVB的各组的尾素明显高于正常对照组,有统计学意义(尸<0.05);与模型组相比,以PCF与VC处理的各组细胞的尾素均低。其中PCF处理组的尾素剂量依赖性降低(尸<。.01)。原位杂交的结果提示了所有UVB照射组均表达p21 mRNA。0.0625%和0.125%PCF组在与正常对照组和模型组相比较时,在统计学上不能显示出差异;0.25%和0.5%PCF组的p21 mRNA水平低于模型组(尸<0.05)而接近正常对照组(尸>.05);PCF剂量依赖性抑制UVB诱导的pZImRNA转录(P<0.05)。绩论以UVB辐射强度103和30rnJ/cm“为参数,分别在无毛小鼠和HaCaT细胞上成功建立了动物和细胞损伤模型。PCF有抗氧化作用,具体表现在:提高T一AOC、SOD、CAT、GSH一PX;降低脂质过氧化产物MDA;真皮I型胶原的表达与分布更接近正常;减少UVB诱导的DNA损伤。PCF能够减少UVB诱导的角质形成细胞细胞凋亡。降低细胞内游离钙离子浓度、抑制线粒体膜电位降低和pZI mRNA的转录、减轻DNA的损伤、下调p53蛋白的表达可能均参与了PCF的抗凋亡作用。……   
[关键词]:PCF;UVB;HaCaT细胞;细胞凋亡;抗氧化剂
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:青岛大学2004年