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邓恩桉组织培养与无性系快繁技术的建立

欧阳磊

  本文对抗寒树种邓恩桉(E.dunnii)的组织培养(tjssue culture)和无性系选育(clone select-breeding)进行了系统的研究。以优树邓恩桉实生苗为材料,以芽诱导方法培养完整植株为途径,研究了生长素IAA、IBA、NAA,细胞分裂素BA、ZT、KT,多效唑PP333,活性炭,基本培养基(大量元素,微量元素,有机物),蔗糖,温度,光照等对芽诱导、增殖、壮苗和生根的影响。在生根方面取得了突破性的进展,基本解决了邓恩桉无性繁殖难生根的问题,选出了几个繁殖系数大和生根率高的优良无性系。为邓恩桉的推广应用打下了坚实的基础,具有一定的开发价值。主要结果如下:1、初代培养:从室外采集枝条,选择顶芽以下第3-6位腋芽尚未萌发的半木质化芽茎段,将其剪切成1cm左右,洗洁剂清洗1.2min,流水冲洗30min以上,然后在超净台上用70%酒精消毒5s,0.1%升汞消毒30s,消毒效果较好,诱导率高,褐化率低。以1/2MS+BA0.2-1.0mg·L~(-1)+IAA0.05-0.5mg·L~(-1)+蔗糖3%+卡拉胶0.55%为基本培养基,暗培养7-10d后转入到温度为24-28℃、较强自然光条件培养,芽生长的速度快且健壮。2、继代培养:继代培养以改良MS为基本培养基,随继代次数的增加逐渐减少细胞分裂素BA和生长素NAA的浓度.最初几次继代,BA的浓度为0.5mg·L~(-1),NAA的浓度为0.2mg·L~(-1)。然后BA的浓度逐渐降低到0.1-0.3mg·L~(-1),NAA的浓度逐渐降低到0.05-0.1mg·L~(-1),继代5-6次后,BA的浓度保持在0.1-0.3mg·L~(-1),NAA的浓度保持在0.05-0.1mg·L~(-1)。继代周期随季节而不同,夏季为15-25d、春秋季为20-35d、冬季为40-50d,芽的月增殖系数为3-6倍,满足工厂化育苗的要求。苗的玻璃化和遗传变异等异常现象很少,节间长度适中,有利于生根。3、壮苗和有效芽诱导:以改良MS+BA0.2mg·L~(-1)+NAA0.1mg·L~(-1)+3%蔗糖+0.55%卡拉胶为基础和对照,①分别加入0.01%、0.03%、0.06%、0.1%的活性炭,同时提高BA的浓度为0.5-1mg·L~(-1),IAA浓为0.1-0.5mg·L~(-1);②分别加入1mg·L~(-1)、2mg·L~(-1)、5mg·L~(-1)的生物素,③改良MS(铁盐、有机物1.5倍),蔗糖分别增加为4%和5%,共11个处理,结果表明:活性炭对邓恩桉组培苗的生长起抑制作用,生物素所起的作用不明显,邓恩桉组培继代苗的生长离不开细胞分裂素和生长素,一旦缺少继代苗很快枯萎死亡。壮苗和有效芽的诱导在工厂化育苗中可以省去,以便节约苗木的生产成本。4、生根:大量元素、蔗糖、生长素(IBA、NAA、IAA)、继代次数以及继代培养中所用激素的浓度、不同无性系和光照对生根均有显著影响.以S(对MS中的大量元素改良而成)+蔗糖2%+卡拉胶0.6%+2-4mg·L~(-1)IBA为基本培养基,根据不同无性系适当改变大量元素中各元素的比例,采用两步生根法,先在基本培养基上完全暗培养7-11d,然后转移到无生长素IBA的培养基上,在较强自然光照下培养,生根率最高可达85%。由于无性系的差别和继代培养次数的不同,生根率有较大的差别。5、优良无性系的筛选:在所选的50原株优树邓恩桉实生幼苗中,不同植株之间在初代培养中芽的诱导率和生长速度,继代培养中的芽增殖倍数和有效芽数量,生根培养中有效芽的生根率等方面,都存在较大的差异,而同一植株的不同芽茎段之间的差异很少,可以看作一个无性系(即由原株单系无性繁殖所产生的一系列分株)。在50个无性系中,有硕士学位论文邓恩按组织培养与无性系快繁技术的建立十多个无性系初代和继代培养中生长良好,组培苗的玻璃化和遗传变异等异常现象很少发生,月增殖系数达3一6倍,得到完整植株的7无性系中有4个无性系(3、13、24和25号)的生根率为412%一85%,成功的建立了无性系快繁体系,可应用于工厂化育苗。……   
[关键词]:邓恩桉;组培;快繁
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中南林学院2004年