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土耳其斯坦东毕吸虫cDNA文库的构建及原肌球蛋白基因的克隆和表达

邢继兰

  东毕吸虫病(orientobilharziasis)是由东毕属吸虫寄生于牛、羊等多种动物的门静脉和肠系膜静脉内引起的一种血吸虫病,其尾蚴也可感染人类引起尾蚴性皮炎(cercarial dermatitis),是一种重要的人兽共患寄生虫病。我国以土耳其斯坦东毕吸虫为主,该病在我国分布广泛,常呈地方和季节性流行,严重危害人们的健康并给畜牧业带来巨大经济损失。由于东毕吸虫感染人后特殊的发育过程,从而引起了人们广泛关注。目前东毕吸虫研究相对滞后于曼氏、日本血吸虫,因此深入研究东毕吸虫就显得尤为重要。本文利用SMART cDNA文库构建试剂盒成功构建了土耳其斯坦东毕吸虫成虫cDNA文库。采用RT-PCR结合RACE和已构建的cDNA文库克隆了土耳其斯坦东毕吸虫原肌球蛋白(tropomyosin,TM)基因,提交GenBank,登录号为AY560898。TM部分编码序列亚克隆至原核表达载体pET28a(+),重组质粒pET28-TM在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达出可溶性融合蛋白,其分子量为37.5KDa左右,利用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白。Western-blotting结果表明纯化蛋白可以识别自然感染东毕吸虫的山羊血清;将纯化蛋白与法国Montanide ISA 206佐剂等体积混合免疫家兔,并收集血清到免疫后第10周。Western-blotting结果表明纯化蛋白可以被特异性免疫后血清识别,表明纯化蛋白可以刺激实验兔产生抗TM抗体。ELISA结果表明抗体在第5周时达到峰值,从第7周到第10周抗体一直保持较高水平。原肌球蛋白较好的免疫原性表明其在疫苗和诊断试剂研制方面有重要的应用前景。上述结果为进一步研究东毕吸虫病的免疫提供重要的基础。……   
[关键词]:土耳其斯坦东毕吸虫;cDNA文库;原肌球蛋白基因;克隆;表达;免疫
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国农业科学院2004年
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