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绿僵菌对东亚飞蝗致病机理的初步研究

黄冬如

  本文选用两株源于不同采集地、分离自不同种蝗虫的绿僵菌菌株,研究了东亚飞蝗蝗蝻感染绿僵菌后组织病理变化、东亚飞蝗蝗蝻血细胞对注射分生孢子后的防御反应、酯酶活性的变化、以及绿僵菌在不同培养基上胞外蛋白酶的产量及其与毒力间的关系。主要结果如下:通过组织切片研究表明,绿僵菌主要从东亚飞蝗体表侵入,72h后可见体腔内有菌丝和组织病变。侵入体内的菌丝在血腔中不断增殖,使得脂肪体、肌肉组织、马氏管和消化道发生病变解体。96h后,肠壁细胞结构开始疏松、内膜解体。5d时,多数蝗蝻死亡,消化道内外布满菌丝。在东亚飞蝗蝗蝻体内注射LA和LD两株绿僵菌的分生孢子液,观察血细胞总数的变化。在注射15分钟后,两者均使蝗蝻血细胞总数比正常不注射稍有下降,30分钟后血细胞总数上升达到最高数值,随后血细胞总数一直呈下降趋势,但两者对蝗蝻的影响差异不明显。对注射分生孢子液后的防御反应观察发现,血细胞能吞噬囊包绿僵菌分生孢子,但是不能阻止其分生孢子的萌发及菌丝的生长,只能起到暂时的抑制作用。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测感染LA和LD两菌株后东亚飞蝗蝗蝻酯酶同工酶的变化显示,同健康幼虫相比,感病蝗蝻的酯酶带变少、变浅,在接近死亡后期更为明显。与此同时,染菌蝗蝻的乙酰胆碱酯酶活性也比健康蝗蝻活性低,随时间的推移,感染LD菌株后东亚飞蝗蝗蝻的乙酰胆碱酯酶活性活性下降的比感染LA菌株的快。用明胶和虫尸粉两种液体培养基对两株绿僵菌的胞外蛋白酶的产酶水平进行分析。两菌株的虫尸粉培养基中蛋白酶产量明显高于明胶液体培养基。这说明虫尸粉中可能含有更适合于刺激绿僵菌产生胞外蛋白酶的特殊营养成分,但LA和LD菌株间的差异不明显。此外,用明胶琼脂平板法对LA和LD两株菌株的胞外蛋白酶产量进行了测定,LA和LD两株菌株的最适产胞外蛋白酶的温度分别是33℃和27℃。实验结果表明,不管用明胶琼脂平板法还是虫尸粉培养基所测得的胞外蛋白酶的产量水平,均与其对东亚飞蝗蝗蝻的毒力之间存在线性关系。因此,可以认为绿僵菌的胞外蛋白酶的产生水平是构成其对东亚飞蝗毒力的一个主要内在因素。……   
[关键词]:绿僵菌;东亚飞蝗;致病机理
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:湖南农业大学2004年