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丙型肝炎病毒E2蛋白相互作用蛋白的研究

张健

  丙型肝炎病毒(HCV)感染致肝细胞损伤机制,很大程度上与病毒蛋白和肝细胞蛋白间的相互作用相关。因此,研究HCV各抗原成分与肝细胞内的蛋白相互作用及其机理能在一定程度上对HCV的致病机制做出解释,为寻找有效防治HCV的方法提供新线索。为研究HCV E2在HCV感染后病毒致病过程中的作用,我们应用酵母双杂交系统3,构建HCV E2诱饵质粒,转化酵母AH109,与含人白细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,于涂有X-α-gal营养缺陷型培养基上筛选生长。挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌提取质粒DNA后进行测序,然后进行生物信息学分析。我们将得到的其中一个未知功能的基因,命名为HCV EZ蛋白结合蛋白1(HCV EZBPI)。我们对HCV EZBPI进行了初步探讨。从人肝癌细胞中得到了HCv EZBPI基因的全长编码序列,构建真核表达载体pcDNA3.1卜)一HCVEZBPI,以及酵母表达载体pGBKT7一HCV EZBPI。进一步应用酵母双杂交(yea 5 t two一hyb:id)技术筛选HCV EZBpl与肝细胞文库结合的蛋白,并应用抑制性消减杂交(suppression subtraetive hybridization,SSH)技术,构建HCV EZBPI激活相关基因差异表达的cDNA消减文库,筛选相关的靶基因片段。在研究HCV EZ的酵母双杂交研究中,我们得到76个与EZ特异性结合的阳性克隆,其中包括14个未知功能基因。在新基因功能的研究方面,我们对其中一个未知功能的基因HCV EZBPI应用酵母双杂交及抑制性消减杂交技术进行了初步的研究,得到了一系列与HCv EZBPI有关系的蛋白编码基因。通过对HCV EZ及其新基因的研究,我们对该基因的功能有了初步的了解,为下一步更加具体的生物学功能、基因表达调控的深入研究开辟道路。……   
[关键词]:丙型肝炎病毒;结合蛋白;HCV;相互作用蛋白
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国人民解放军军医进修学院2004年