手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

逆转录病毒介导人胰岛素原突变基因转染肝细胞分泌成熟胰岛素的实验研究

兰丽珍

  第一部分人胰岛素原基因的定点突变和修饰目的:完成人胰岛素原基因5个碱基的定点突变,并加上信号肽和增强表达的Kozak序列,使之能在普通细胞中被Furin蛋白酶识别,从而去除C肽,分泌成熟胰岛素。方法:采用PCR体外定点突变技术(PCR-SDM),设计4对引物,引入5个Furin蛋白酶识别的突变位点,通过重叠延伸法PCR扩增,使人胰岛素原编码基因B10密码子由CAC突变为GAC;C3密码子由GAA突变为AAA;C4密码子由GCT突变为CGT;C32密码子由CTT突变为CGT,并在其上游加上信号肽和Kozak序列,将扩增片段克隆入T载体并测序。结果:DNA测序结果表明预期位点突变符合要求,信号肽和Kozak序列正确引入。结论:应用PCR诱导突变技术,在体外能准确、简便有效诱导国家自然科学基金资助(No.30070356)胰岛素原基因突变,使体外应用非内分泌细胞构建高效分泌成熟胰岛素细胞克隆成为可能。……   
[关键词]:人胰岛素原;PCR;定点突变
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:重庆医科大学2004年
App内打开