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猪圆环病毒2型感染对猪肺泡巨噬细胞功能的影响

周双海

  猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征等相关疾病的重要病原。猪肺泡巨噬细胞(PAM)既是其重要靶细胞,又是重要的免疫细胞,本研究将PCV2 BF株经口、鼻接种40日龄健康仔猪,在接种后第3、7、14、21、42天收集PAM。通过测定感染后PAM的凋亡与吞噬功能、表面分子与抗原递呈功能相关分子及细胞因子的表达动态,从细胞、分子与基因水平系统分析了PCV2感染对猪肺泡巨噬细胞功能的影响。用RT-PCR技术从PAM中扩增和克隆了猪抗原递呈功能相关分子SLA-DM、CD80、CD86,和猪细胞因子IL-1β、TNT-α、IL-8、MCP-1、IL-18及GM-CSF。经测序鉴定后,利用反向PCR技术构建了相应的缺失cDNA竞争分子。通过竞争PCR方法,建立了各分子的标准竞争曲线,并得到其直线回归方程。用流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测PAM凋亡现象,EA花环试验测定Fc受体数目,吞噬鸡红细胞试验测定吞噬功能。结果显示在整个试验期内均没有观察到PAM凋亡,表明PCV2感染不会诱发PAM凋亡。PAM的Fc受体和吞噬鸡红细胞数目在感染后7天内下降,之后基本恢复,表明PCV2感染猪的PAM吞噬和清除病原体的功能出现短暂下降。用流式细胞术测定PAM的MHC分子数,用定量竞争PCR技术检测抗原递呈功能相关分子SLA-DM、CD80和CD86基因的mRNA转录动态。结果显示SLA-DR分子阳性PAM数在PCV2感染后第3天时增加,随后明显下降,21天以后恢复正常;而SLA Class Ⅰ分子一直没有明显变化;SLA-DM、CD80与CD86的mRNA含量变化趋势相似,均是在感染后第3天时降到最低,7天时快速上升,21天以后基本恢复正常。MHC分子SLA-DR、抗原递呈途径中的重要伴侣分子SLA-DM和重要共刺激分子CD80与CD86等表达下调,表明PCV2感染猪的PAM抗原递呈功能减弱。用定量竞争PCR技术检测细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-8、MCP-1、IL-10、IL-12p40、IL-18、GM-CSF等基因mRNA的表达动态。结果显示IL-10mRNA在接种后7天内表达增加,14天以后恢复正常;IL-12p40、IL-18、GM-CSF和MCP-1mRNA表达在接种后3天内急剧减少,之后增加,14天或21天时到达峰值,之后下降至恢复正常:IL-8 mRNA在接种后7天内明显下降,14天时才急剧上升:TNF-αmRNA没有明显变化;而IL-1βmRNA在接种后14天内均维持高水平表达。细胞因子mRNA转录失衡,特征为IL-10 mRNA表达过量和IL-12p40、IL-18、及GM-CSF等细胞因子mRNA表达减少,表明PCV2感染猪PAM的免疫调节功能受到影响。综合以上实验结果,PCV2感染后肺泡巨噬细胞在短期内吞噬能力下降、抗原递呈功能减弱、免疫调节功能受到影响,表明PCV2感染可导致猪肺泡巨噬细胞免疫功能的抑制。……   
[关键词]:猪圆环病毒2型;猪肺泡巨噬细胞;凋亡;抗原递呈;细胞因子
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国农业大学2004年