手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

桃组织培养及遗传转化的研究

吴延军

  桃是世界性重要果树,我国是桃主产国,产量位居世界各国之首,浙江省是桃主产区之一,平均年产量在10万吨以上。桃果色、香、味、质俱佳,很受消费者欢迎,在果品市场占据重要地位。但桃是乙烯跃变型果实,采后软化进程迅速,大多数品种成熟季节又适逢高温高湿,果实极不耐贮运,严重影响其销售与外运,这是长期制约桃生产的主要问题之一。延长桃贮藏期常采用低温冷藏,但它易造成桃果冷害,结果并不十分理想。桃贮藏保鲜的现状表明延长桃贮减时间、提高贮藏品质,延长货架期,减少采后腐烂等目标难以靠常规措施实现。随着现代生物技术的发展,植物转基因技术已得到广泛应用,国际上番茄转ACC合成酶和ACC氧化酶反义基因的成功为其他作物解决贮藏难问题提供了范例和良好前景,因此本研究也运用这一思路开展桃组培与转基因研究。本研究以我国南方主栽品种玉露桃和湖景蜜露桃为试材,建立了桃幼胚和幼胚子叶再生体系,运用基因枪介导法和根癌农杆菌介导法转化桃幼胚子叶获得了转ACO反义基因的转基因植株,并对转基因材料进行了分子鉴定。主要研究结果如下:1.以奉化玉露和湖景蜜露桃为试材,分别在盛花后45 d和55 d采集桃幼果并取其幼胚接种,置于正交设计的16种培养基上,26℃±1℃暗培养,研究基本培养基类型、激素等因素对桃幼胚脱分化的影响,筛选出适合愈伤组织分化的激素组合。结果表明:1)培养基是影响桃幼胚愈伤组织诱导的最重要因素,MS适合45 d、55 d玉露和55 d湖景蜜露幼胚诱导愈伤组织。2)激素诱导愈伤组织因品种而异,NAA 1.0 mg/L对45 d、0.5 mg/L对55 d玉露,BA 0.5 mg/L对55 d湖景蜜露效果较好,在试验浓度范围内2,4-D对二品种幼胚发育45 d、55 d均无明显效果。3)幼胚的发育状态是影响诱导愈伤组织的另一因素。盛花后45 d的幼胚愈伤组织诱导率最高达96.6%,而盛花后55 d的幼胚愈伤组织诱导率为81.6%。桃幼胚愈伤组织可在MS+0.05 mg/L NAA+1.0 mg/L BA的培养基上分化成芽,再生芽可在1/2 Ms+1.0 mg/L IBA培养基上生根。2.盛花后45 d、55 d玉露和55 d湖景蜜露桃幼胚子叶,置于MS+2%蔗浙江大学博:卜学位论文:桃组织培养及遗传转化的研究(2 0()4)搪+0.75%琼脂并加入不同浓度配比激素的培养基上,于26℃士l℃,光照强度2000一3000 lux,16h/8h光暗周期的环境下培养,研究激素配比、品种、取样时间、损伤方式对桃子叶再生能力的影响,并对不定芽发生部位进行了观察。结果表明:NAA 0.50 mg/L+BA一0.0 mg/L、NAA 0.05 mg/L+ToZ 3.0 mg/L二组激素配比有利于桃子叶再生:玉露的再生能力较高于湖景蜜露,盛花后55d的幼胚子叶比花后45d的幼胚子叶稍易再生;带胚芽子叶纵向刻伤再生率高。桃幼胚子叶可通过愈伤组织分化和器官直接分化二条途径再生,不定芽可产生于子叶的背茎面、向茎面等各部位。再生不定梢(芽)在1/2MS+2.岛蔗搪+0.75%琼脂+IBA 1.0 mg/L+Ad 20 mg/L的培养基上可以生根。3.以玉露桃幼胚作为根癌农杆菌介导转化的受体,通过对GUS基因瞬时表达率的分析,研究此转化体系的最佳实验参数。实验结果表明,预培养时间、感染时间、共培养时间和根癌农杆菌诱导物AS等对转化效率都有一定的影响。预培养ld、感染巧min、共培养42h和不添加AS时GUS基因的瞬时表达率最高。4.通过基因枪轰击盛花后55d玉露桃幼胚带胚芽的单瓣子叶转化带有桃ACO反义基因的PBIO.8载体,在363个外植体中最终获得了5个抗性芽和l个抗性植株。5.利用根癌农杆菌GV3101将ACO反义基因导入桃幼胚子叶,获得了卡那霉素抗性植株。在供试的1379个玉露桃幼胚子叶中获得了39个抗性芽,湖景蜜露桃614个幼胚子叶中获得了11个抗性芽。抗性芽通过微芽嫁接培养有可能成株。6.对基因枪和农杆菌介导获得的桃转ACO反义基因的部分抗性材料进行PCR、Southern blot和GUS基因表达等分子检测,结果表明外源反义ACO基因己经整合到桃的基因组中。……   
[关键词]:;幼胚;幼胚子叶;愈伤组织;分化;再生;微芽嫁接;ACO基因;反义;GUS;基因枪;农杆菌;遗传转化;分子检测
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:浙江大学2004年
App内打开