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根癌农杆菌介导的MAPKK基因转化大岩桐的研究

代建丽

  促分裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK)是生物体内信号转导途径的关键组分之一,已发现它组成的信号转导级联途径在植物中起着多方面的作用。用基因工程技术定向改良花卉品质,是当今花卉育种的重要内容。本研究用野生型、突变型MAPKK基因转化观赏花卉大岩桐,为进一步研究MAPKK基因的功能奠定基础,也为花卉植物的转基因提供实验系统。本研究构建了野生型、突变型MAPKK基因植物表达载体,并用冻溶法将其导入了根癌农杆菌LBA4404。载体构建的过程包括目的基因的PCR扩增、目的基因连接到pMD 18-T载体、目的基因连接到中间表达载体pIB1、目的基因及启动子、终止子连接到表达载体pBin19。最后得到的植物表达载体pBM含目的基因及植物选择标记基因NPTⅡ。以叶盘为外植体,初步建立了大岩桐的遗传转化体系。研究发现,卡那霉素(Kan)对大岩桐不定芽和不定根的诱导有较强的抑制作用,其选择浓度分别为50 mg/L和10 mg/L。头孢霉素(Ce)对大岩桐不定芽的诱导也有抑制作用,但较卡那霉素弱,其抑制农杆菌生长的适宜浓度为200 mg/L。在所试验范围内,叶盘外植体的转化效率以预培养2天、共培养4天、菌液感染10min最高。100μmol/L的乙酰丁香酮(AS)可提高大岩桐的转化效率。用PCR法对转化再生植株进行了检测,证实NPTⅡ已经整合到大岩桐的基因组DNA中。野生型、突变型MAPKK基因的转化效率分别为1.7%和0.7%。……   
[关键词]:MAPKK基因;大岩桐;根癌农杆菌;遗传转化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华南师范大学2004年