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生物素中间体的酶促拆分及催化条件的研究

皮雄娥

  从土壤和实验室保藏的若干酯酶菌株中初筛挑出171株具有生物素中间体内酯水解酶活性的菌株,经反复筛选,从中挑出一株酶活力高、选择性好的菌株ZGW12,酶活力达到231U/g。根据其形态特征初步鉴定认为可能属于镰刀霉菌(Fusarium sp.)。对ZGW12菌株进行培养条件优化,得到最佳培养基为:葡萄糖20 g/L,蛋白胨8g/L,酵母膏5g/L,玉米浆4g/L,K_2HPO_40.10g/L。最佳培养条件为:接种量6%;培养温度30℃,装液量为15%,初始pH为5.5-6.0。经优化后其酶活力达到1846 U/g,比未优化时提高将近8倍,通过对ZGW12菌株发酵动力学研究和代谢规律分析,该菌发酵产酶的生物合成模式是延续合成型,酶的发酵类型是部分生长偶联型。指数生长期产酶生成速率与菌体浓度成正比,在稳定期产酶生成速率与菌体最大生长量成正比,所以发酵初期大量生长菌体和延长稳定期时可使酶活力提高。ZGW12菌株静息细胞在pH为7.2,温度在40℃下具有较好的稳定性。不同的介质对静息细胞酶的活性有影响,在水相中静息细胞酶表现出最高活性,但无论在甲苯溶液还是在水溶液中在pH7.5和45℃时均表现出最高酶活。并分别对甲苯溶液和水溶液中酶反应动力学规律作了初步研究。在甲苯溶液中酶促最大反应速度低于水溶液中酶促最大反应速度。且表观米氏常数要大于水溶液中表观米氏常数。考察了反应条件对ZGW12静息细胞立体选择性水解生物素中间体左旋内酯的影响,在pH为7.5,温度在45℃,底物浓度为1%,加酶量为6g,200rpm下反应24h后ZGW12静息细胞拆分生物素中间体内酯ee值达到91.5%,取得了较好的拆分效果。……   
[关键词]:生物素中间体;ZGW12镰刀霉菌;醋酶;发酵;酶促拆分
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江工业大学2004年
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