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洋桔梗叶片再生体系的建立及农杆菌介导的NPRI基因转化洋桔梗的初步研究

毛元荣

  通过正交等实验对洋桔梗品种LisaBlue叶片再生体系进行了系统的研究。结果表明:洋桔梗叶片不定芽诱导最适培养基为MS+ZT 0.5mg/L+NAA 0.01mg/L,培养基pH值6.3,光照强度60μmol.m~(-2).s~(-1);不定芽诱导生根最适培养基为1/4MS+IBA 1mg/L,糖浓度50g/L,琼脂浓度4g/L,不添加活性炭。通过洋桔梗抗生素敏感性实验,确定了洋桔梗转化不定芽筛选抗生素(潮霉素,Hyg)浓度为50mg/L:抑菌抗生素采用浓度为250mg/L的头孢霉素。以洋桔梗叶盘为外植体,通过根瘤农杆菌菌株EHA105介导,用构建于质粒pCambia 1301的NPR1基因转化洋桔梗。实验结果表明:叶片预培养2d,农杆菌浸染20min,与农杆菌共培养2d时,筛选培养基上洋桔梗叶盘不定芽分化频率最高,达13.3%。随机选取4株移栽成活的具有Hyg抗性的洋桔梗植株进行GUS染色和PCR分子检测,均为阳性,初步证明外源NPR1基因已整合到洋桔梗基因组中。……   
[关键词]:洋桔梗;NPR1基因;叶片再生体系;遗传转化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:上海师范大学2004年