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除虫链霉菌DNA降解基因簇add的定位及生物学功能的初探

高小博

  制作了携带完整add基因簇的pHZ1318的限制内切酶图谱,根据酶谱进行亚克隆得到pHZ2104和pHZ2105。将它们分别以整合形式导入Dnd表型缺失突变株ZX1中,根据互补能力的不同将Dnd功能必需区定位在11.6kb的XbaⅠ-EcoRⅤ片段上。将这个11.6kb的区域以整合形式导入无Dnd表型的两个异源宿主中,均使它们获得了Dnd表型,表明这段11.6kb的区域包含了完整的异常修饰功能,初步定位了基因簇。同时构建了add基因簇的基因中断质粒pHZ2115,pHZ2116和pHZ217,发现它们都不能赋予ZX1 Dnd表型。将add基因簇亚克隆到测序载体pBluescript Ⅱ SK(+)上,采用ExoⅢ缺失突变法得到了66个单向递减缺失亚克隆,然后对这些克隆进行测序。同源性比较揭示add基因簇的addA基因与固氮酶基因nifS高度同源,add与变铅青链霉菌dnd核苷酸的同一性为78%。建立了除虫链霉菌的接合转移系统,并构建了用于置换全部基因簇的基因置换质粒pHZ2114和addA的基因中断质粒pHZ2130,为研究除虫链霉菌add基因簇的生物学功能奠定了基础。……   
[关键词]:除虫链霉菌;DNA降解;基因簇
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2001年