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猪MSTN基因多态性及分子标记的研究

李绍华

  对猪肉用性状育种的目标主要集中在瘦肉量和肉质上,其中对瘦肉量的追求一直是科学家和生产者努力的重点。双臀基因(Myostatin,MSTN)属于TGF-β(Transforming Growth Factor-β)超家族,在发育和成熟的骨骼肌中特异表达,其表达产生肌肉生长抑制因子GDF—8(Growth/differentiation Factor-8)t GDF—8因子抑制肌肉的生长和分化。MSTN基因的保守区域的碱基发生突变,则它表达的产物就会丧失抑制肌肉生长的功能,或该产物的抑制功能受到影响,从而肌肉得以过度的发育和生长。本文研究了猪MSTN基因的多态性及其与生产性状的关系,目的在于寻找猪瘦肉率的分子标记,从而为猪的育种提供一种新的途径和方法。以66头加系“双肌臀”大白猪、20头丹系大白猪为实验材料,对猪MSTN基因外显子2和外显子3采用了3对引物进行PCR—SSCP多态性分析,并且,对具有SSCP多态性的片段进行了克隆和测序,找出等位基因的差异位点。以47头“双肌臀”大白猪为实验材料,研究了猪MSTN基因SSCP多态性与生产性状(背膘厚、瘦肉率)之间的关系。本实验得出结果如下:1.经3对引物的PCR—SSCP分析,发现在猪MSTN基因的外显子2和外显子3中存在SSCP多态性。在外显子2中表现出3种基因型CC、CT和TT,“双肌臀”大白猪中等位基因C和T的频率分别为0.417和0.583,丹系大白猪分别为0.225和0.775;在外显子3中表现出2种基因型GG和AG,“双肌臀”大白猪中等位基因A和G的频率分别为0.341和0.659,丹系大白猪分别为0.300和0.700。2.对在外显子3表现SSCP多态性的MSTN基因扩增片段进行了克隆测序,测序结果表明,MSTN基因发生了单碱基的突变:即A~(1008)→G,该突变未导致氨基酸的改变,属沉默突变,但在该位点处产生了一个ApaI限制性内切酶位点。3.对在外显子2表现SSCP多态性的MSTN基因扩增片段进行了克隆测序,测序结果表明,MSTN基因发生了单碱基的突变:即G~(480)→T,该突变未导致氨基酸的改变,属沉默突变。4.在47头“双肌臀”大白猪中,分析了MSTN基因外显子2和外显子3的SSCP多态性与猪生产性状的关系。外显子2中的多态性:经方差分析表明,MSTN基因的多态性与猪的背膘厚、瘦肉率无显著性相关;外显子3中的多态性;经t显著性检验结果表明,MSTN基因的多态性与猪的背膘厚呈显著性相关(P<0.04),与猪的瘦肉率相关(P<0.07)。5.以“双肌臀”大白猪为实验材料,采用引物1进行PCR扩增,扩增产物用ApaI限制性内切酶消化,建立了猪MSTN基因PCR—RFLP分子标记技术。……   
[关键词]:“双肌臀”大白猪;双臀基因;PCR-SSCP;PCR-RFLP
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2001年