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灰树花多糖的结构及其生物活性

李小定

  本文以灰树花子实体为原料,利用现代分离分析手段,对灰树花多糖的提取工艺、纯化分级、理化性质、结构特性以及灰树花粗多糖和部分多糖级分的体内外抗肿瘤作用、免疫调节功能和抗氧化作用进行了较系统的研究,主要结果如下:1灰树花多糖的分离、纯化、性质与结构特性灰树花子实体经沸水浸提、乙醇沉淀可得到灰树花粗多糖PGF,经正交试验,提取时总料液比为20倍(2:2:3),浸提时间10h(2:2:3)(分3次提取),浓缩比重为1.035,醇沉浓度为80%时多糖得率最高,为13.34%。PGF经Sevag法脱蛋白、DEAE-Sepahadex A-25柱层析可得到两种均一多糖PGF-1、PGF-2和两种非均一多糖PGF-3、PGF-4。PGF-1、PGF-2、PGF-3和PGF-4的中性糖含量分别为97.22%、95.37%、92.83%和88.71%,蛋白质含量分别为1.13%、2.25%、4.73%和8.86%,四种多糖级分均是新的糖蛋白质缀合物。经气相色谱分析PGF-1为葡聚糖,PGF-2、PGF-3和PGF-4由葡萄糖、甘露糖和半乳糖组成,摩尔比分别为1:2.35:1.22、1:0.35:0.24和1:0.22:0.38。经GPC法检测,PGF-1和PGF-2的数均分子量分别为117262.0Dal和118803.4Dal,重均分子量分别为118237.7Dal和119612.5Dal。经红外光谱与NMR分析,四种多糖级分主要含α-糖苷键,PGF-2还含有少量β-糖苷键。经紫外光谱分析与β-消除反应分析,四种多糖级分的糖蛋白分子中多糖与氨基酸的连接方式含O-连接,且PGF-2中存在-O-Ser连接。四种多糖级分可与刚果红发生颜色反应,但不能肯定多糖级分为螺旋结构。2灰树花多糖的抗肿瘤作用及机理研究PGF、PGF-1、PGF-2、PGF-4体外均对S_(180)肿瘤细胞有较强的抑制作用,在中、高剂量下(0.04~4μg/孔)四种多糖的抑制作用相差不大,在低剂量下(0.004μg/孔)PGF与PGF-1的抑瘤效果优于PGF-2和PGF-4。4种多糖与S_(180)细胞共同培养24h后,能降低肿瘤细胞膜唾液酸的含量,三种多糖级分具有抑制肿瘤细胞膜流动性改变的作用,而PGF无此作用。四种多糖均能降低肿瘤细胞膜中花生四烯酸的含量。PGF与PGF-1灌胃剂量50~150 mg/kg·d时,对小鼠S_(180)肉瘤的抑制率分别为26.95%~37.59%和20.57%~34.75%,同剂量下PGF-1的抑制作用低于PGF。PGF与PGF-1对荷瘤小鼠血清乳酸脱氢酶的活性无影响;能显著提高荷瘤小鼠红细胞过氧化氢酶的活性。两种多糖能明显提高荷瘤小鼠免疫脏器胸腺的重量,但对脾脏重量的增长作用不显著;能明显增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能;明显增强淋巴细胞转化功能,并呈现剂量效应关系;明显增强DNFB诱导的迟发型超敏反应;华中农业大学2002’博士学位论文显著增强荷瘤小鼠脾抗体生成能力;明显提高血清lgM溶血素的含量,揭示它们具有增强荷瘤小鼠特异性和非特异性免疫功能的作用。3灰树花多糖的抗氧化作用灰树花粗多糖和4种多糖级分均有明显抑制·OH和02‘一的作用,并呈现量效关系。PGF、PGF一1、PGF一2、PGF一3和PGF一4对心H的半数抑制浓度(ICS。)分别为1.45 mg/ml、l.88mg/ml、l.72mg/ml、5.69mg/ml和o.6lmg/ml;对02’一的IC5o值分别为442.62卜g/ml、588.89林g/ml、700.53林g/ml、458.45林g/ml和375.29林g/ml。灰树花粗多糖和4种多糖级分均能抑制小鼠体外温育、Fe2+诱导和H20:诱导下肝匀浆MDA的生成,其中抑制活性最强的为PGF一4,其次是PGF,其它3种多糖的作用相差不大。5种多糖在0.05mg/ml一1.6Omg/ml浓度下能抑制小鼠肝线粒体MDA的生成,在0.2mg/ml和0.smg/ml浓度下能抑制小鼠肝线粒体的肿胀。PGF、pGF一1、pGF一2和pGF一4均可对抗reZ++ve引起的小鼠肝线粒体膜流动性的下降,表明灰树花多糖具有抑制肝线粒体氧化损伤的作用。pGF、pGF一l、pGF一2和pGF一4在67卜g/ml一533“g/ml的浓度下能明显抑制HZoZ诱导的大鼠红细胞氧化溶血和体外温育下红细胞MDA的生成,对大鼠红细胞的氧化损伤具有保护作用。……   
[关键词]:灰树花多糖;灰树花多糖级分;提取;纯化;理化性质;结构;抗肿瘤;免疫调节;抗氧化
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:华中农业大学2002年