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灌喂大豆蛋白、面筋蛋白的胃蛋白酶酶解物对大鼠免疫功能的影响

杨小军

  一、大豆蛋白、面筋蛋白胃蛋白酶酶解生物活性肽的制备经碱提酸沉法和氯化钠缓冲液洗涤法分别制备大豆蛋白和面筋蛋白。以蛋白底物:胃蛋白酶=30:1的比例,在pH1.4,37℃,水解2小时。茚三酮法测定水解液水解度。结果显示:大豆蛋白和面筋蛋白水解液含氮量分别为2.15±0.04mg/mL(n=2)和1.20±0.00mg/mL(n=2),水解度分别为14.49%和12.92%,平均肽链长度分别为6.9和7.7。二、大豆蛋白、面筋蛋白胃蛋白酶酶解物对大鼠体重的影响四组饲喂基础日粮的28日龄SD大鼠,每组25只(雄15只、雌10只)。每天分别灌喂未经水解的大豆蛋白液(对照Ⅰ组)、未经水解的面筋蛋白液(对照Ⅱ组)和大豆蛋白胃蛋白酶酶解液(实验Ⅰ组)、面筋蛋白胃蛋白酶酶解液(实验Ⅱ组)各1mL,折合蛋白含量均为5mg/mL。实验共21天。在35日龄和49日龄分别称重。体重经协方差分析表明,35日龄时各组体重无显著性差异;49日龄大鼠,实验Ⅰ组较对照Ⅰ组增加了10%;实验Ⅱ组比对照Ⅱ组高出了9.3%;实验Ⅱ组体重与对照Ⅰ组差异极显著(p<0.01)。三、大豆蛋白、面筋蛋白胃蛋白酶酶解生物活性肽对大鼠免疫功能的影响灌喂两种酶解活性肽的大鼠于实验结束(49日龄)处死,取相关材料。系列Ⅰ两种蛋白酶解物对大鼠免疫脏器重量的影响实验结束后,取胸腺和脾脏称重。发现:实验Ⅰ组的胸腺和脾脏重量分别比对照Ⅰ组高40%和29.7%,差异极显著(p<0.01);实验Ⅱ组的胸腺和脾脏重量比对照Ⅱ组高37.1%和43%,差异极显著(p<0.01)。经多重比较两个对照组间和两个实验组之间胸腺和脾脏重量均无显著性差异。胸腺和脾脏相对重量(占体重百分比)差异性与绝对重量结果相一致。系列Ⅱ两种蛋白酶解物对大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响49日龄处死大鼠,于无菌条件下取腹腔巨噬细胞。用MTT法检测其活性,结果显示:灌喂大豆蛋白水解液能显著促进大鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性;该组比对照Ⅰ组A_(570)上升67%(p<0.01);实验Ⅱ组较对照Ⅱ组的A_(570)上升了12%。实验Ⅰ组比实验Ⅱ组高出了42.5%,差异显著(p<0.05)。表明大豆蛋白水解液和面筋蛋白水解液均能促进大鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能,且二者活性上存在不同。系列Ⅲ两种蛋白酶解物对大鼠血液淋巴细胞转化的影响无菌条件下采血,用~3H-TdR掺入微量全血法检测两种蛋白水解物对大鼠T淋巴细杨小军 灌喂大豆蛋白、面筋蛋白的胃蛋白酶酶解物对大鼠免疫功能的影响胞转化的影响。结果表明:灌喂大豆蛋白水解液能显著促进大鼠外周血淋巴细胞增殖,该组与对照1组的SI值差异极显著h的.01);实验*组的SI值较对照*组上升了16.7%,但差异不显著。实验I组比实验11组高出了12.2%,无显著性差异。两个对照组间,面筋蛋白对照组比大豆蛋白对照组高23%,但差异不显著。表明经胃蛋白酶水解的大豆蛋白水解液和面筋蛋白水解液均能促进大鼠的T细胞转化,大豆蛋白水解液活性较强。系列IV两种蛋白酶解物对大鼠产生抗体的影响对灌喂蛋白液的四组大鼠(每组则只)于实验结束前一周(42日龄),皮下注射新城疫疫苗 0.5 mL/只,一周后进行血凝抑制实验。结果表明:灌喂大豆蛋白水解液和面筋蛋白水解液能显著提高大鼠血清抗体的血凝抑制效价heminhibition titer);实验 1组比对照 1组 HI值上升了 33.3%,差异极显著(p<0.01);实验*组较对照*组HI值上升了38.5%,差异极显著(P<0.of)。表明经胃蛋白酶水解的大豆蛋白水解液和面筋蛋白水解液均能极显著促进大鼠B细胞免疫,两种水解液在促进体液免疫上未见显著性差异。系列V两种蛋白酶解物对大鼠肠道粘膜分泌SI gA的影响取灌喂实验中四组大鼠的整个肠道内容物,经等比例(W/V)生理盐水稀释后,离心取上清。用放射免疫分析法门IA)检测肠腔SIgA水平。结果显示:实验1组的SIgA水平较对照 1组上升了 34.3%,差异极显著(P<0.of);实验*组比对照 11组高出了28.6九差异显著…钥.05*两个实验组间无显著性差异,但实验1组比实验11组高出了四个百分点;对照I组和对照*组间几乎无变化。表明经胃蛋白酶水解的大豆蛋白水解液和面筋蛋白水解液均能显著促进大鼠肠道粘膜分泌SI gA,且大豆蛋白水解液表现出更强的活性。五个系列实验结果表明灌喂两种蛋白酶解物可显著促进大鼠免疫脏器的生长、增进腹腔巨噬细胞吞噬能力、提高血液淋巴细胞转化,并促进肠道SI gA的分泌,强化粘膜免疫。四、大豆蛋白、面筋蛋白胃蛋白酶酶解物对大鼠几种血清激素和细胞因子水平的影响上述实验组大鼠49 日龄处死,无菌条件下采血,分离血清,用放射免疫分析法(RIA)分别测定血液Insulin、T3、T4、LePtin和 IL-2水平。结果表明:实验 1组的几上水平比对照I组高出了38.1见 差异极显著…幻.of\ 实验11组的儿{水平较对照*组增加了38.4%,差异极显著(P(.01)。无论是两个对照组间,还是两个实验组间,IL-2水平都无显著性变化?……   
[关键词]:大豆蛋白;面筋蛋白;生物活性肽;生长;免疫;激素;细胞因子
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2003年