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中国李RAPD、ISSR和SSR反应体系的建立及其品种资源遗传多样性分析

乔玉山

  中国李是我国和世界广泛栽培的重要果树树种之一。本文选择了56个中国李品种资源(包括2个欧洲李品种),从叶片基因组DNA提取方法入手,在建立和优化中国李RAPD、ISSR和SSR反应分析体系的基础上,利用这三种分子标记对中国李品种资源进行聚类分析,旨在促进中国李品种资源分类和遗传育种研究。结果表明:1、改良陈大明法是提取中国李叶片基因组DNA的适宜方法。2、以5′-GACCGCTTGT-3′为随机引物,建立了优化的中国李RAPD反应分析体系:25μL反应体系中,Taq酶、Mg~(2+)、引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:1.0u、2.5mmol·L~(-1)、20ng、40ng和0.2mmol·L~(-1)。利用该优化反应体系,用10个随机引物,构建了5个中国李品种的RAPD指纹图谱,并以共有谱带率对这些品种遗传关系进行了分析,结果表明:5个中国李品种的共有谱带率平均为33.2%,变异幅度为20.1%~44.9%。3、以5′-(AC)_9A-3′为引物建立和优化了中国李ISSR反应分析体系:25μL ISSR反应体系中,Taq酶、Mg~(2+)、引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的最适浓度分别是:0.3u、1.5mmol·L~(-1)、0.2μmol·L~(-1)、20ng和0.16mmol·L~(-1)。利用该优化体系,以5′-(AC)_9T-3′为引物,构建了中国李18个品种的ISSR指纹图谱,该引物可将这些品种完全区别开来;以5′-(AC)_9C-3′为引物,构建了李属6类种质资源的ISSR指纹图谱,该引物区分率为100%。4、中国李品种适宜的SSR反应分析体系是:25μL SSR反应体系中,Taq DNA聚合酶、Mg~(2+)、每个引物、模板DNA和dNTPs等5种成分的适宜浓度分别是:1.5u、2.0mmol·L~(-1)、0.8μmol·L~(-1)、30~40ng和0.16~0.24mmol·L~(-1)。5、采用RAPD、ISSR和SSR等三种分子标记技术对中国李品种资源54份和2个欧洲李品种进行了遗传多样性分析,并以品种间的遗传相似系数构建了Jaccard聚类树状图。结果表明:中国李品种间遗传相似系数较低,平均为0.451,从分子水平证明了我国中国李品种的遗传多样性很高;将供试中国李品种分为五类,其中第一类是原产我国北方地区的一些品种,第二是原产我国南方地区的一些品种;第三类是从国外引进的品种,并提出了将我国的中国李品种分为北方品种群和南方品种群观点。……   
[关键词]:中国李;RAPD;ISSR;SSR;遗传多样性;聚类分析
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2003年