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抗SIgA分泌片单克隆抗体ELISA药盒的构建及其临床研究

胡正强

  目的通过纯化初乳获得SIgA分泌片(SC),免疫家兔制备抗SC多克隆抗体;再对抗SC单克隆抗体杂交瘤细胞株进行复苏和扩大培养,制备抗SC单克隆抗体。应用抗SC单克隆抗体的高度特异性和抗SC多克隆抗体的较高亲和力,通过配伍选择,构建成ELISA药盒。并应用药盒对宫颈癌患者宫颈分泌物SIgA进行初步研究,对不同病变期肝炎病人血清SIgA作进一步探讨。方法实验分三部分:(1)SIgA和SC的分离纯化及鉴定;(2)抗SC单克隆抗体ELISA药盒的构建;(3)抗SC单克隆抗体ELISA药盒的临床研究。结果初乳经凝胶过滤、离子交换层析和盐析,可分离得到SIgA和SC。所得产物经免疫双向扩散、SDS-PAGE和免疫印迹法鉴定,进一步确认为SIgA和SC。通过高分子蛋白相对迁移率曲线可计算出SC的分子量约为75kD。将纯化的SC免疫家兔制备抗SC多克隆抗体,经鉴定,该抗体ELISA效价为1:5000,且为针对SC抗原的特异抗体。通过对抗SC单克隆抗体杂交瘤细胞株2D_1和4G_3的复苏和扩大培养,制备抗SC单克隆抗体,测得抗体ELISA效价抗SC mAb_(2D1)为:1:2000;mAb_(4G3)为:l:4000;相对亲合力抗SC mAbZo:为:5.2 p g/mL;mAb4c3为:4.9协g/mL。ELISA药盒的最佳配伍选择:固相抗体为抗SC以b,检测SlgA,酶标抗体为抗SC mAb4G3。药盒鉴定表明:灵敏度4.2n岁ml;特异性鉴定表明:有关蛋白BSA、IgG和血红蛋白OD值检测结果都显著低于SlgA(P<0.05),该药盒对SlgA检测具有较高特异性;OD值稳定回归曲线斜率为一0.01/月,表明药盒稳定性较好。将抗SC mAb ELISA药盒应用于临床研究表明:(l)正常妇女宫颈分泌物SlgA含量较高,早期宫颈癌分泌物SlgA水平显著降低(P<0.05),中晚期宫颈癌可能由于低分化癌细胞的反复刺激,SlgA含量相对升高,但仍较正常人为低(P<0.05)。(2)病毒性肝炎患者随着患病程度的加重,slgA水平逐步降低,但均显著高于正常人(P<0.001)。结论应用初乳分离纯化SlgA和SC,制备抗SC多克隆抗体;并将抗SC多克隆抗体作为固相抗体,标记抗SC单克隆抗体制备ELISA药盒,具有高度的特异性和亲和力。抗SC单克隆抗体ELISA药盒可应用于多种疾病(如宫颈癌和病毒性肝炎)slgA研究,其粘膜或血清中SlgA含量的变化对指导该疾病诊断、鉴别诊断和治疗具有一定意义。……   
[关键词]:ELISA药盒;SIgA;单克隆抗体;分泌片;抗体特异性;固相抗体;低分化癌细胞;抗原检测;中晚期宫颈癌;高特异性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川大学2003年
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