手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

镉的雌性性腺毒性与雌激素受体关系的实验研究

李煌元

  目的:研究镉的雌性大鼠性腺毒性(镉对大鼠动情周期和垂体、卵巢的性激素的分泌功能的影响),以及雌性大鼠性腺毒性与雌激素受体之间的关系。方法:(1)30只成年雌性SD大鼠按体重随机分为三组,每组10只,染毒剂量分别为0、0.25、1.0mg/kg,亚慢性皮下注射染毒,每天1次,每周5天,连续6周。染毒第20天开始每天二次用阴道脱落细胞涂片法连续观察并记录动情周期;(2)24只成年雌性SD大鼠按体重随机分为三组,每组8只,染毒剂量分别为0、0.5、1.0 mg/kg(以Cd~(2+)计)。每天以1ml药液/kg鼠重等容量腹腔注射,每天1次,连续染毒7天后处死抠眼球采血制备血清放射免疫测定黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、孕酮(P)和雌二醇(E_2);另一批24只成年雌性SD大鼠同上剂量分组,染毒至14天处死抠眼球采血制备血清放射免疫测定LH、FSH、P、E_2,观察染镉对大鼠血清性激素的变化;通过亚慢性染毒(剂量为0、0.5、1.0 mg/kg,每周6天,共5周),应用GnRH刺激试验观察GnRH注射前及注射后40分钟血清中LH、FSH含量。(3)成年雌性SD大鼠用常规方法去除卵巢,迅速取出子宫,匀浆、低温高速离心分离制备子宫细胞质雌激素受体,作为体外雌激素受体放射性配基结合试验的受体样品;①运用正交实验设计(L_(16)(4~5))进行单剂量配基结合试验研究两因素—锡的雌性性腺毒性与雌激素受体关系的实验研究中文摘要一隔的浓度和预先孵育时间对EZ结合ER的影响,即给予不同的锅浓度(0,10一,,10一5or 10一‘M)和预先孵育不同时IbJ(0,30,60,90 min),在存在或缺乏200倍过量的己烯雌酚于4℃条件下孵育16一18小时后用活性炭葡聚糖(DCC)吸附分离游离的3H一EZ,用Packard Tri一Carb 2300TR型液体闪烁计数仪测量放射性强度(dPm),计算最大结合位点数(Bmax);②进一步用多剂量配基结合试验研究福对EZ结合ER能力的影响,用不同的锅浓度(0,10一:,,10一5 0r10一7M),在存在或缺乏200倍过量的己烯雌酚于4℃条件下孵育16一18小时后用活性炭葡聚糖(DCC)吸附分离游离的‘,H一EZ,用液体闪烁计数仪测量放射性强度(dpm),按照Scatchard方法运用软件计算最大结合位点数(Bmax)和平衡解离常数(Kd);③用竞争结合抑制试验,计算锅的IC油值并以己烯雌酚为参照品计算相对亲和力(RBA),研究隔与ER的结合能力。结果:(1)高剂量组大鼠动情间期和动情周期异常率较其他剂量组明显增高(P<0.05),表明福对大鼠动情周期产生影响;(2)连续染福7天和14天的大鼠血清FSH、LH含量,高、低剂量组与对照组比较均无显著差异(P>0 .05);而血清中EZ含量,染毒7天的高剂量组显著低于对照组,染毒14天高、低剂量组均显著低于对照组(P<0 .05);血清中P含量,染毒7天的低剂量组显著低于对照组,染毒14天高剂量组显著低于对照组(P<0.05)。这些结果表明了短期染福对卵巢的性激素分泌(EZ和P)产生影响,主要表现为降低血清中的性激素含量,但未见垂体的促性腺激素分泌(FSH和L[I)产生影响。注射GnRH前,各剂量组间大鼠血清中LH、FSH未见显著差异(P>0.05),注射GnRH后,血清中LH、FSH水平较注射前明显升高,并有统计学意义(P<0 .05),但注射后染镐组大鼠血清中LH水平显著低于对照组(p(0 .05)。(3)体外不同浓度的福(0,10一,,10一‘or 10一,M)对EZ与ER的最大结合位点数福建医科大学2000级硕士研究生学位论文中文摘耍(Bmax)的改变未见显著性意义(P>0.05),体外福孵育不同时间(0,30,60,90 min)对EZ与ER的最大结合位点数(Bmax)的改变也未见显著性意义(P>0.05),同时也未见体外不同浓度的福与孵育不同时间有交互作用(P>0 .05),这些结果均表明福尚未影响EZ与ER的结合;(4)体外不同浓度的福(0,10一3,10一5 or 10一,M),各组之间Bmax值未见显著性差异。对各组之间Kd值作单因素方差分析,也未见显著性差异。这些结果表明锡未影响E:与ER的结合能力。其中锅对Bmax值的影响与前面的结果相一致;(5) DES竞争结合的的半数抑制浓度(IC。。)为3.802x1o一,。M,与以往文献报道(2.25 x 10一,。士0.05‘10一10M)相一致,说明该实验可靠。而随着CdCI,浓度的不断增高,与大鼠胞浆ER结合的3H一EZ并没有明显的下降,但有下降的趋势,所以氯化福的半数抑制浓度(IC。。)约为10一‘~10一3M之间,Cd与ER结合的相对亲和力(RBA)约为DES的10一6一10一,。结论:(1)隔具有明显的重要的雌性性腺生殖毒性,福对下丘脑一垂体一卵巢轴的内分泌干扰作用可能是其重要机制之一。(2)锅对卵巢雌激素、孕体激素分泌功能的影响是福的内分泌干扰作用的重要表现之一。(3)福对雌激素与子宫雌激素受体结合(最大结合位点和雌激素受体亲和力)无明显的干扰效应,故其并非福的内分泌干扰作用机制。(4)锅与子宫雌激素受体的结合能力较弱,这样微弱的结合能力在其雌性性腺生殖毒性中的作用等尚待进一步研究。……   
[关键词]:;性腺毒性;动情周期;性激素;促性腺激素;GnRH刺激试验;环境内分泌干扰物;放射性配基竞争结合试验;雌激素受体
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:福建医科大学2003年