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克拉维酸产生菌的改良

孟勇

  本文在克拉维酸高产菌的选育过程中,根据生化和遗传学原理,建立了克拉维酸高产菌的理性化筛选方法,即:应用抗终产物结构类似物、底物甘油耐受量、营养缺陷型作为选择压力,能有效地除去低效价菌株,避免了随机筛选的盲目性,提高高产菌株的检出率,较传统筛选法优越。以棒状链霉菌Streptomyces clavuligerus CCRC11518为出发菌,通过紫外线诱变,筛选一株抗终产物类似物舒巴坦钠浓度为14mg/ml的突变株CCRC11518—Ⅰ_(10),较出发菌CCRC11518(效价为282.4μg/ml)提高了73.5%,效价达到489.9μg/ml。以抗终产物类似物舒巴坦钠突变株CCRC11518—Ⅰ_(10)为出发菌,经DES诱变,筛选到一株耐甘油浓度为15%的突变株CCRC11518—Ⅱ_(29),效价为703.4μg/ml,较出发菌Ⅰ_(10)提高了43.5%。以甘油耐受性突变株Ⅱ_(29)为出发菌,经NTG诱变和五氯酚浓缩,筛选到一株效价为834.8μg/ml的营养缺陷型突变株CCRC11518—Ⅲ_(50),较CCRC11518—Ⅱ_(29)突变株的效价提高了18.6%。营养缺陷型突变株CCRC11518—Ⅲ_(50),较原始Streptomyces clavuligerus CCRC11518突变株的效价提高了196%。克拉维酸高产菌CCRC11518—Ⅲ_(50)连续传代7代后,克拉维酸的产量保持稳定。通过单因子和多因子正交实验法,对高产菌CCRC11518—Ⅲ_(50)的发酵条件进行研究,确定了CCRC11518—Ⅲ_(50)的最佳发酵条件为:甘油30g/L、麦芽浸膏7.5g/L、大豆蛋白胨60g/L、FeSO_4·7H_2O 1g/L、K2HPO_4 3H_2O 1g/L、MgSO_4·7H_2O 2g/L、蒸馏水定容至1000ml、PH6.5~6.7,以15%接种量接种于20ml上述发酵培养基/250ml三角瓶,25~26℃,220r·min~(-1)培养72小时后下摇瓶测效价。克拉维酸高产菌CCRC11518—Ⅲ_(50)在最佳发酵条件下,克拉维酸产量达到1082.6 pg/血l,较原有发酵条件下提高了29.6%,较原始出发菌CCRC 1 1 518提高了2.83倍,并在1000耐三角瓶和1600ml半自动发酵罐作提供了放大试验,效价分别达到1168.3p留ml和1025,spg/ml,为克拉维酸工业发酵了高产菌株和技术参数。……   
[关键词]:克拉维酸;棒状链霉菌;菌种改良;诱变育种;发酵条件;理性化筛选
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川大学2003年