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银条(Stachys Floridana Schuttl.ex Benth.)脱毒及快速繁殖体系的建立

张国裕

  以“二细一粗”银条作为研究试材,对银条茎尖分生组织的培养条件、不同处理对提高茎尖再生植株脱毒率的效果进行了研究,并利用不同外植体探讨了银条再生快繁的适宜途径。目的是获得脱毒种株并进性大量、快速的繁殖,以解决生产中银条由于结籽率低,且难以培养成苗,长期以根状茎进行无性繁殖所造成的病毒累积的问题,并为进一步进行银条的营养利用、生理代谢、生物育种研究奠定基础。试验结果表明:银条的离体培养以MS作为基本培养基最为适宜,再生苗生长快速,植株健壮。茎尖分生组织培养在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖4%+琼脂6.5g/L上,成苗率可达74.1%,最适宜茎尖的培养;经指示植物法、电镜观察检测,再生植株的脱毒率随茎尖切割长度的减小而提高,但过小的茎尖操作、培养困难,培养周期长,成苗率低。0.5mm大小的茎尖成苗率与脱毒率相对较高,分别为71.4%、30.0%,较为适合培养;茎尖的重复切割培养与接种植株进行预热处理均有显著提高脱毒率的作用,但同时也降低了成苗率。植株在42℃高温下,经15d热处理后,0.5mm大小茎尖切割培养成苗率与脱毒率分别达到50.0%、57.1%,重复切割培养3次后则分别为28.6%、87.5%。为减小操作难度,缩短周期,银条植株经42℃,15d热处理后,切取0.5mm大小茎尖进行一次培养较为适宜。不同生育时期的外植体愈伤组织的诱导能力不同,刚展开的幼嫩叶片、粗壮的幼嫩茎段及花蕾长度在0.5 cm左右时的花药最适宜愈伤的诱导,诱导率最高。幼嫩茎段与花药在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 1.5mg/L+IAA 0.5mg/L培养基上,幼嫩叶片在MS+6-BA 2.5mg/L+NAA 1.5mg/L+IAA 1.0mg/L上,愈伤组织诱导效果最好,愈伤生长快速,颜色鲜艳,继代培养不褐化。愈伤组织不定芽的分化中,花药诱导形成的愈伤难以形成不定芽;叶片与茎段诱导的愈伤可以在MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.8mg/L+GA_3 2.0mg/L上分化形成不定芽,诱导分化率分别为71.4%、78.6%。对幼嫩叶片、幼嫩茎段与茎尖进行不定芽的直接诱导与增殖,发现银条叶片组织未能再生;茎尖、茎段组织直接诱导较大不定芽的再生率较低,平均每个外植体最多可诱导不定芽5~7个。而通过茎段先诱导出不定芽芽团,再进行芽的伸长这一途径,每个外植体诱导的不定芽数平均可提高到14.3个,且芽团经5次继代增殖再生能力没有衰退表现,再生植株生产潜力非常巨大,是一条较优的再生途径。茎段不定芽芽团诱导培养基为添加6一BA 5.Om留L的MS培养基;增殖培养基为MS+6一BA 4.5m叭+GA3 1 .Om留L;不定芽伸长培养基以MS+6一BA 1.5 mg几+N AA 0.4m叭+GA30.5m叭较好。对不同温度、光照条件、以及蔗糖、6一BA、CCC浓度对离体培养条件下银条根状茎诱导的影响进行研究表明:全黑暗的培养条件是银条根状茎诱导的必需因子,短日照(8扮d)与长日照(14扮d)均促使甸旬茎发育成侧枝;高浓度蔗糖有利于根状茎的诱导,单独使用低浓度的蔗糖(3%)不能诱导根状茎产生而形成黄化的侧枝,再添加6一BA 5.Om留L十CCC 50Om留L后虽然可以形成根状茎,但单株产量很低。6一BA与CCC对根状茎形成具有明显的促进作用,能增加根状茎数,提高单株产量。银条根状茎的诱导温度以20℃为宜,提高温度会降低根状茎数。再生苗在1/2 Ms+N AA o.sm留L十活性炭0.3%上生根效果最好,将生根的完整植株移栽到消过毒的1蛙石:1珍珠岩的基质上,成活率高达95.8%。……   
[关键词]:银条;茎尖培养;脱毒;快速繁殖;根状茎
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北农林科技大学2003年