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平阳霉素碘油乳剂治疗血管发育异常的基础和临床研究

孔伟东

   研究背景血管发育异常(VA)又称血管瘤或血管畸形,是一类常见的先天性脉管发育畸形疾病,青少年发病率高(0.3%~1%)。按照其组织成分的不同主要分为儿童血管瘤、静脉畸形(VMs)、毛细血管畸形(CMs)、淋巴管畸形和动静脉畸形(AVMs)等几类;按发病部位可分为内脏和体表二大类。血管畸形尤其是体表和肢体血管畸形(如VMs、AVMs等)可对患者外观和肢体功能等造成明显影响。对于大范围、部位深在的复合肢体血管畸形,不仅常规治疗难以见效,甚至还有危及生命的危险。所以,血管畸形的临床治疗至今仍被认为具有极大的挑战性。平阳霉素(PYM)是一种具有自主知识产权的国产抗肿瘤抗生素,目前除应用于恶性肿瘤的化疗外,也用于治疗一些良性肿瘤和富血管病变并已取得良好的疗效。二十世纪八十年代,国内学者开始应用平阳霉素局部注射治疗体表的儿童淋巴管瘤、血管瘤等,因其疗效确切得以推广。九十年代起,国内介入放射学家创新性地将此技术移植到介入治疗领域,采用平阳霉素碘油乳剂(PLE)行动脉栓塞治疗子宫肌瘤和肝巨大血管瘤等良性病变,因其损伤小、疗效确切、并发症少等优点,逐渐受到临床学界重视,使得该类疾病在一定适应征范围内有取代传统治疗的趋势。初步的实验研究表明平阳霉素具有一定的祛血管作用,可能与抑制血管内皮细胞作用有关,但其具体作用机理尚未明了。PLE动脉内灌注对血管及周围组织的作用方式和相关机制也缺乏相应的实验依据。同时以平阳霉素为主的祛血管疗法(血管硬化治疗)在临床上能否用于各种血管畸形的治疗和疗效如何等相关问题尚值得深入研究。一、PYM抑制人脐静脉内皮细胞生长的体外研究目的通过体外实验观察PYM对人脐静脉内皮细胞株一一一石CV304细胞生长、增殖和凋亡的影响,以证实PYM对血管内皮细胞的抑制作用及了解相关的影响因素。材料和方法采用MTT法比较不同浓度PYM和Bl」涯(lx10-2一lxl护林岁ml)作用不同时间(24h、48h、72h)对培养的ECV304细胞的生长抑制作用。通过流式细胞仪检测PYM对ECV304细胞周期的影响,采用A刀nexlnV-R叮C双变量流式细胞术结合荧光显微镜观察PYM体外诱导EcV304细胞凋亡变化和细胞死亡分析。结果PYM和BLM均可抑制ECv304细胞的体外生长,10林动川浓度P丫M作用24h、48h、72h的细胞生长抑制率分别为44.7%、59.7%、74.4%;其抑制效应表现为剂量依赖性和时间依赖性。药物作用24h、48h、72h时,PYM的Ics。值分别为32.94林动咐、2.56林岁血、0.75“动元,BLM的Ics。值分别为125.75林动川、6.59林gl]川、2.46林gh川。1林动‘的PYM作用24h后,G0一Gl期细胞百分数由(45 .38土1.00)%下降为(材.7肚1.44)%,与对照组比较无显著性差异;s期细胞百分数由(44 .91土1.76)%下降为(1 6.24土1.40)%,GZ一M期则由(9.72士0.77)%上升至(3 9.汉公.40)%,与对照组比较有显著性差异伊丈0.01)。同时,荧光显微镜观察显示部分细胞发生典型凋亡改变。1林岁血PYM作用24h、48h、72h平均凋亡率分别为6.6%,巧.3%,193%,两两比较有显著性差异(入0.01)。100林岁而浓度PYM作用24h、48h、72h,平均凋亡率分别为n.7%,16名%,22.7%,高低浓度组间比较具有显著性差异伊狱0.05)。此外,PYM对ECV304细胞还具有较强的细胞毒作用,较高浓度组细胞坏死率(48.7%~603%)明显高于低浓度组(16.8%~23.9%),两者比较有显著性差异(尸欢0.01)。结论1.PYM和BL矛匹对Ecv304细胞均具有较强的生长抑制作用,其抑制效一4一应表现为时间依赖性和剂量依赖性;PYM较BLM作用更强。2.一定浓度PYM对ECV304细胞周期的阻滞作用在GZ一M期。3.PYM对ECV304细胞具有细胞毒和凋亡诱导双重作用,低浓度时两者作用强度相当,高浓度则以细胞毒作用为主。4.PYM可能通过细胞周期阻滞抑制、凋亡诱导作用和直接的细胞毒作用机制以抑制ECV304细胞的体外生长和增殖。二、PLE犬肾动脉栓塞对血管和肾组织的影响及其机制探讨目的通过犬肾动脉PLE栓塞模型,以期了解在不同时间PLE对毛细血管、动静脉和相关组织结构影响,并探讨其机制。材料和方法利用seldinger穿刺术和选择性插管法,建立犬肾动脉碘油药物栓塞模型。31只家犬随机分为3组:①假手术组(n=2);②PYM组:分ld、7d、1妃共3个时间组(n二3X3);③PLE组:分ld、3a、7d、1妃、Zsd、56d共6个时间组(n=3 X6)。将pLE(pYMZmg+Lp4nil)或pYM溶液(Zmg)通过导管注入右肾动脉。分别采用光镜、电镜和免疫组化方法,观察各时间点不同节段肾血管和组织的显微结构、超微结构改变以及PLE组肾脏组织FGF~2蛋白表达变化。结果肾血管改变:PYM组实验肾血管病变轻微。ld时表现为局灶性血管内膜轻度肿胀,以肾小球毛细血管拌为主,7d内膜肿胀减轻,14d内膜形态基本恢复正常。 PLE组实验肾1d外观轻度肿胀,3d血管内膜轻度肿胀,部分内皮细胞脱落,7d肾脏明显肿胀,毛细血管拌和动脉中膜(以小叶间动脉和入球小动脉为主)纤维素样坏死,伴血栓形成和血管周炎细胞浸……   
[关键词]:内皮细胞;凋亡;平阳霉素;碘油;成纤维细胞生长因子-2;静脉畸形;综合征;硬化治疗
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国人民解放军第一军医大学2003年