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丝状蓝细菌Anabaena PCC7120 gfp转化系统的构建

徐华

  绿色荧光蛋白基因(green fluoresent protein gene,gfp)已在多种原核和真核生物细胞中得到表达,同时gfp作为一种新的具有许多优良特性的报告基因在现代分子生物学中已得到广泛应用。检测gfp只需要紫外光或是蓝光的激发,根本不需要底物的选择;另外,携带GFP的融合蛋白可以提供好的荧光标记且不干扰细胞内的蛋白质功能与定位。可以说GFP是研究活细胞中基因表达和蛋白质分布的最好手段。将突变型的gfp基因(gfps65T)亚克隆到大肠杆菌-蓝藻的穿梭载体pRL25C并转化到含有helper plasmid pRL528的大肠杆菌HB101中。然后用三亲本(含穿梭载体pRL25C和helper plasmid pRL528的HB101、含接合质粒RP4的HB101、鱼腥藻PCC7120)杂交的方法将重组质粒转移到一种具有固氮能力的鱼腥藻(Anabaena)PCC7120中,质粒提取酶切分析和PCR鉴定表明携带重组质粒的工程鱼腥藻(Anabaena)PCC7120构建成功。取工程鱼腥藻制成破片在普通荧光显微镜下没有观察到绿色荧光,只是看到蓝藻本身的红色荧光,可能是因为没有使用合适的通荧光滤片,蓝藻本身激发的红色荧光遮挡了绿色荧光。在MRc-600型激光共聚焦扫描显微镜下看到了清晰的绿色荧光,表明gfp基因获得了克隆与表达。……   
[关键词]:绿色荧光蛋白;gfp;鱼腥藻PCC7120;激光共聚焦扫描显微镜
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:福建农林大学2003年