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鸭疫里默氏杆菌和鸭源致病性大肠杆菌及鸭沙门氏菌的RAPD研究

李淑梅

  本研究采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,利用20条随机引物对血清1型、血清2型、血清4型和血清5型的4株鸭疫里默氏杆菌(Riemerella Ahatipestifer)、5株5个血清型(O_1、O_2、O_5、O_(78)、O_(128))的鸭源致病性大肠杆菌(pathogenic Escherichia coli)和5株同一血清型的鸭沙门氏菌(salmonella)进行RAPD分析。从20条引物中选择8条引物并对其扩增图谱进行多态性分析和聚类分析;进一步又在8条引物中筛选一条具有种间鉴别力的引物,进行单一模板的多态性分析,寻找三种菌的特征性条带;再利用此引物进行混合模板的扩增,验证此特征性条带的稳定性和可重复性。结果如下:(1)随机引物的筛选:这20个引物可分为①无扩增产物的引物G-01、G-20;②扩增产物无多态性的引物G-04、G-05、G-08、G-09、G-10、G-13、G-14、G-15、G-17和G-19;③扩增产物多态性较丰富的引物G-02、G-03、G-06、G-07、G-11、G-16和G-18;④具有种间鉴别力的引物G-12。(2)扩增结果:所有扩增出的片段分子量在0.2-3.2kb之间。随机引物扩增出的条带数在5-16条之间,共扩增出102个条带,品种间相同的条带有1个,多态性条带有101个,多态性条带占99%。(3)8条引物进行的聚类分析结果符合传统的分类:沙门氏菌与大肠杆菌的遗传距离较近,在相似性系数为0.725时聚在一起;鸭疫里默氏杆菌与大肠杆菌、沙门氏菌遗传距离相对较远,在相似性系数为0.54时,三者相聚。(4)具有种间鉴别力的引物G-12的多态性分析得出RA、E.coli、Sal.的种特异性标记分别为535bp、1227bp和330bp。(5)引物G-12的混合模板扩增仍能得到特征性标记。本研究是第一次使用RAPD技术对鸭疫里默氏杆菌、鸭源致病性大肠杆菌、鸭沙门氏菌进行多态性分析,该方法具有快速、简单、准确的优点。……   
[关键词]:鸭疫里默氏杆菌;鸭源致病性大肠杆菌;鸭源致病性沙门氏菌;RAPD;多态性分析
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2003年