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埃普利诺菌素注射液的研究

潘保良

  阿维菌素类药物是目前使用最广泛的抗线虫和外寄生虫药物。其中,埃普利诺菌素(EPR)有高效和低残留的特点,是目前唯一可以用于所有牛(包括泌乳期奶牛和肉牛)且不需休药期的阿维菌素类药物,具有广阔的应用前景。目前,EPR商品化的制剂只有浇泼剂。为了充分发掘EPR的应用潜力,降低用药量,提高生物利用率,进行了EPR注射液的研究。通过配方的筛选,研制出了具有缓释作用的1%EPR注射液。建立了注射液中EPR的高效液相色谱(HPLC)检测方法。长期稳定性试验表明,所研制的注射液比较稳定,有效期为23.97±0.90个月。埃普利诺菌对大鼠经口急性LD_(50)雌为35.90mg·kg~(-1),雄为38.30mg·kg~(-1),属于高毒。注射液对小鼠经口急性LD_(50):雌为2150.00mg·kg~(-1),雄为3830.00mg·kg~(-1),属于低毒。进行了以多拉菌素(DOR)作内标物检测牛奶和血液中EPR的荧光HPLC检测方法的研究。分别用甲醇和乙腈作为血浆和牛奶中EPR的提取剂和蛋白质的沉淀剂,用ODS C_(18)固相萃取柱进行纯化,在抽真空的条件下对经提取和纯化后的EPR和DOR进行干燥,用三氟乙酸酐和N-甲基咪唑作为衍生化剂,加入冰醋酸,在加热的条件下对EPR和DOR进行荧光衍生化。用荧光HPLC对衍生化后的EPR和DOR进行检测,检测条件如下:流动相:A液(乙腈:无水甲醇=1∶2)∶水=98∶2;流速:1.0ml/min;激发波长:366nm;发射波长:465nm;进样量:100μl,柱温为室温。在1~80ng ml~(-1)浓度范围内,血浆样品中EPR浓度与HPLC检测值之间有良好的线性关系(R~2=0.999)。在1~40 ng mL~(-1)浓度范围内,牛奶样品中EPR浓度与HPLC检测值之间有良好的线性关系(R~2=0.997)。血浆样品中的检测限为:0.08ng ml~(-1),牛奶样品的检测限为:0.1ng ml~(-1)。在5~40ng ml~(-1)浓度范围内,血浆样品的重复性(CV%)为5.48%~7.62%,牛奶样品的重复性(CV%)为6.32%~9.05%。在5~40 ng ml~(-1)浓度范围内,血浆样品的回收率为94.90%~111.65%,牛奶样品的回收率为83.4~105.65%。该方法适宜于EPR药代动力学研究和牛奶中EPR残留检测。进行了EPR注射液在泌乳奶牛血浆和牛奶中的动力学研究。在血浆中,EPR在给药后39h(T_(max))达到最大药物浓度44.0ng/ml(C_(max));吸收半衰期(T_(1/2mb))和消除半衰期(T_(1/2el))分别为11.9h和164h;曲线下面积(AUC)为7354ng·h/ml;平均残留时间(MRT)为221h。结果表明,EPR注射液在奶牛体内的生物利用率高于浇泼剂。在牛奶中,EPR在给药后49.8h(T_(max))达到最大药物浓度(C_(max))6.39ng/ml,AUC值为1194 ng·h/ml,MRT为765h,奶/血分配系数为0.16。奶样中所检测到的最大药物浓度为9.00ng/ml,没有超过FAO所规定的EPR在牛奶中的最大残留限量(MRL)---20ng/ml。进行了EPR注射液对兔耳螨、绵羊螨虫和线虫、肉牛虱子和线虫的疗效试验。EPR注射液以0.2mg/kg剂量进行皮下注射对兔耳螨、绵羊螨虫和线虫、肉牛虱子和线虫的驱杀效率均为100%。其中,对兔耳螨的持效期长达35天,对绵羊线虫和螨虫、肉牛虱子和线虫的持效期长达42天。……   
[关键词]:埃普利诺菌素注射液;内标法;荧光高效液相色谱;药代动力学;临床疗效试验
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国农业大学2003年