手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

利用分枝杆菌降解植物甾醇生产雄甾烯酮的研究

王风清

  本实验利用分枝杆菌M1与M2切除植物甾醇C_(17)位边链,制备ADD与AD,主要研究内容包括以下几个方面:1.分析测定方法的建立:薄层层析法,以乙酸乙酯:石油醚(6:4)作为展层剂,以硅胶作为固定相,主要用于定性分析底物与产物;紫外吸光光度法,采用双波长(254nm与298nm)检测,主要用于快速定量分析ADD与AD;根据高效液相色谱与薄层层析相同的工作原理,采用硅胶柱,在薄层层析分析法基础上建立了高效液相色谱法,同时建立了两种定量测定方法:标准曲线法与内标法,高效液相色谱法主要用于准确定量测定产物ADD与AD;气相色谱法,采用FID检测器和大口径毛细管柱,主要用于分析底物甾醇,根据FID的工作原理,确定了各物质的相对校正因子,气相色谱法可用于定量分析底物的四种成份和产物AD(D)在发酵液中的相对含量。2.生产菌种的性质:实验中发现菌体在培养过程中随着营养物质的消耗,细胞形态发生有规律的变化,从长杆状逐渐变为短杆状,最后变为球形;这种形态分化与菌体降解甾醇的活性有一定相关性:当菌体为长杆状时转化活性很高;当菌体变为短杆状时转化活性明显下降;菌体变为球形时转化活力基本消失。两株实验菌M1与M2在菌体形态上没有区别,但在生产能力上有较大差别,根据菌株对底物转化能力的大小,选择M2作为主要研究对象。3.工艺参数的确定:详细研究了一级转化法与二级转化法两种工艺。一级转化法中:斜面种子用MYC/S2培养基29℃恒温培养60h,冷冻保藏不超过20d,转接发酵培养基MYC/02的接种量为7%;二级转化法中:液体种子的接种种龄为35h~40h,以7%的接种量接种发酵培养基MYC/02,并优化了发酵培养基的培养条件:pH=7.0、温度29℃、保证充足的溶氧。4.投料的方式:通过对乙醇法、Tween80法、环糊精法及超声波法等的试验,确定以Tween80乳化底物的投料方式,即用0.5%~1.0%的Tween80悬浮甾醇,在120℃高温中乳化,然后用于配制发酵培养基MYC/02。5.5L发酵罐转化工艺优化:在摇瓶实验的基础上,进行了5L罐扩大培养实验,在培养过程中保持转化温度为29℃,流加10%NaOH与2M盐酸控制pH为7.0,通过调节空气流量与搅拌转速保持充足的供氧。5L罐转化结果(转化168h):①投料量为0.3%,底物转化率为100%,AD(D)产率为90%以上;②投料量为0.5%,底物转化率为95%左右,AD(D)产率为85%左右;③投料量为1.0%,底物转化率为50%~60%,产物生成率在50%左右。……   
[关键词]:分枝杆菌;侧链降解;植物留醇;雄甾-4-烯-3;17-二酮;雄甾-1;4-二烯-3;17-二酮
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:天津科技大学2003年
App内打开