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裸鼠脊髓转移灶人粘液表皮样癌细胞系Ms的建立及其生物学特性

杨宏林

  本研究用裸鼠尾静脉注射法、组织块培养法获得粘液表皮样癌裸鼠脊髓转移细胞系,应用光镜及电镜下形态学观察、染色体分析、细胞计数法、流式细胞术、软琼脂克隆形成试验、裸鼠皮下成瘤实验和人工肺转移模型等方法,探讨了粘液表皮样癌脊髓转移细胞系的生物学特征,并比较了其与Mc3细胞的差别。一、粘液表皮样癌脊髓转移细胞系Ms的建立1.将对数生长期的Mc3细胞单细胞悬液,每只裸鼠尾静脉注射含5×10~6个细胞,共注射50只,2.注射56日后观察到有一只裸鼠出现了双侧后肢截瘫。3.脱颈法处死截瘫小鼠,经解剖未发现肉眼可见的肺、肝、脑、脊髓异常。4.分别取其脊髓、肺、肝、脑组织用含10%(v/v)的胎牛血清的RPMl1640培养液,行组织块法原代培养。5.于3日后仅脊髓组织块周围长出了扁平多角形上皮细胞样细胞,呈“铺路石”样外观6.该细胞在体外的生长稳定,已传代50次以上,体外培养已维持2年,命名为粘液表皮样癌脊髓转移细胞系简称Ms(其M代表muoCpldermoid,s代表Spnlnlcod)。二、地细胞的生物学特性1、形态学观察结果:MS细胞核浆比增大,核仁增大增多,可见巨核、多核细胞,核分裂像多见。透射电镜观察Ms细胞多呈圆形,核浆比例大,细胞核巨大不规则,可见切迹,以常染色质为主,核仁较大,可见大量细胞器,其中线粒体和内质网丰富、大量粘液颗粒样颗粒,微绒毛丰富。与Ms细胞相比,Me3细胞形态多样、细胞间大小差异较大。2、染色体分析结果:Ms和Me3细胞染色体都保持了人类染色体(的形态特征,前者染色体数目37~119,众数60。后者细胞染色体数目25~113,众数61。3、细胞增值速度的测定结果:MS细胞对数生长期群体倍增时间为43h,M。3为38h。4、细胞周期测定结果:流式细胞仪测得MS细胞对数生长期的细胞周期分布为:GI期61.8%,GZ期9.3%,S期22.7%,MC3细胞则分别为*期 62.3%,GZ期11.5%S期26.l%。5、克隆形成率 MS细胞克隆形成率为41%;MC3为38%。两种细胞形成克隆形态均为球状和单层细胞片状,形态相似。6、MS肿瘤细胞裸鼠皮下致瘤性4/4,瘤体倍增时间41h MC3细胞致瘤性4/4,瘤体倍增时间44h。皮下肿瘤组织学特征相似。7、MS细胞裸鼠人工肺转移率为3/3,肺转移结节数68土48;MC3转移率为 3/3,肺转移结节数 42士23;两者肺转移灶组织病理特点相同。……   
[关键词]:粘液表皮样癌;脊髓转移;细胞系
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国人民解放军第四军医大学2003年