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EDA在牙胚中的表达及其对人牙乳头间充质细胞的作用

甘云娜

  先天性外胚层发育不全无汗综合症(Hypohidrotic Ectodermal Dysplasia, HED)是以毛发稀少(hypotrichosis)、汗腺缺失(hypohidrosis)、全部或部分牙齿缺失(anadontia/hypodontia)为主要临床特征的一类先天性遗传性疾病。该疾病主要有3种遗传方式:X染色体隐性遗传(XLHED)、常染色体显性遗传(ADHED)以及常染色体隐性遗传(ARHED)。其中以XLHED最为常见。XLHED的致病基因EDA基因已于1996年由Kere J.克隆成功。此后的研究表明EDA基因编码的蛋白为TNF配体家族成员。有研究表明EDA基因在小鼠的口腔上皮以及帽状期牙胚的外釉上皮中表达,EDA基因的突变可引起釉结节的发育异常,推测EDA基因在调控小鼠牙齿的形态发育中占有重要作用。但是,目前尚没有关于EDA基因在人牙胚组织和细胞中具体作用的研究。本文主要通过制备EDA蛋白的多克隆抗体,借助免疫组织化学、细胞免疫荧光染色等方法对EDA蛋白在人和小鼠牙胚组织和人牙乳头间充质细胞中的表达,及其过表达对人牙乳头间充质细胞一般生物学特性及EGFR表达的影响进行了研究,以探索EDA在牙胚发育中的作用。我们成功地构建了EDA基因的原核表达载体,并使其在大肠杆菌体内获得高效表达。将获得的目的蛋白免疫兔子可以产生高效价的多克隆抗体,为检测EDA蛋白在各种待测组织和细胞中的表达奠定了基础。用制备的抗体对人和小鼠牙胚组织作免疫组化研究,结果表明各个时期人和小鼠牙胚组织中均不能检测到EDA蛋白的表达。但可在颌面部的表皮、腺体、软骨中检测到EDA蛋白的表达。体外培养的人牙乳头间充质细胞则有EDA蛋白的弱表达。I第四军医大学博士学位论文我们还成功的构建了EDA基因的真核表达载体,并筛选出稳定转染EDA基因的人牙乳头间充质细胞,相关的研究表明EDA蛋白的过表达可以抑制人牙乳头间充质细胞的生长和碱性磷酸酶的活性,并促进其EGFR的表_达。……   
[关键词]:先天性外胚层发育不全无汗综合症;EDA基因人牙乳头间充质细胞;表皮生长因子受体
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国人民解放军第四军医大学2003年