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CpG-ODN免疫增强作用的实验研究

张金萍

  目的:设计含非甲基化胞嘧啶和鸟嘌呤的寡聚脱氧核糖核苷酸(CpG-ODN),以期用足月新生儿脐血筛选出具有较强免疫增强作用的CpG-ODN;比较CpG-ODN对新生儿(早产儿和足月儿)脐血和成人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖效应;观察CpG-ODN对孕鼠及其新生鼠、免疫抑制鼠和老年鼠体液免疫功能的影响。方法:按不同设计原则设计5种CpG-ODN,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法从中筛选出具有较强免疫增强作用的CpG-ODN;用MTT法观察CpG-ODN对新生儿(早产儿和足月儿)脐血和成人外周血单个核细胞增殖的差异性。用公认对正常小鼠有明显免疫增强作用的CpG1826(5’-TCCATCTCACGTTCCTGACGTT-3’)免疫孕鼠(20μg/只)、免疫抑制鼠(20μg/只)和老年鼠(20μg/只或30μg/只),用ELISA法检测孕鼠及其新生鼠、免疫抑制鼠和老年鼠的血清IgG抗体,并取小鼠脾脏进行病理切片并HE染色,在镜下观察脾脏的细胞结构变化。结果:筛选出1条具有较强免疫增强作用的CpG-ODN(5’-GGTGCATCGATGCAGGGGGG-3)。该条CpG-ODN对成人PBMC增殖效应最明显,其次是足月儿,但对早产儿的增殖效应不明显;CpG1826可以提高正常成年、免疫抑制鼠和老年鼠血清IgG抗体水平,对孕鼠及其子鼠血清IgG水平无明显影响;20μg/只的CpG1826剂量没有导致胎儿宫内发育迟缓(IUGR)等并发症。结论:①MTT法是一种筛选具有免疫增殖效应CpG-ODN的理想实验方法;②新生儿脐血可作为筛选CpG-ODN免疫增殖效应的实验材料;③CpG-ODN(5’-GGTGCATCGATGCAGGGGGG-3’)具有明显的免疫增强作用,早产儿、足月儿脐血和成人外周血单个核细胞对该CpG-ODN反应具有差异性;④以20μg/只的CpG1826剂量免疫孕鼠,孕鼠及其新生鼠没有出现免疫增强作用,也未导致IUGR等不良反应;⑤CpG1826对正常成年鼠、免疫抑制鼠和老年鼠均有较强的免疫增强作用,提示CpG-ODN是一种新型的免疫佐剂,有较大的开发价值及广泛的临床应用前景。……   
[关键词]:CpG-ODN;增殖;抗体;免疫;新生儿;孕鼠;免疫抑制鼠;老年鼠
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:暨南大学2003年