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同种异体骨髓间充质干细胞移植修复新西兰白兔心肌梗死区域的研究

李长岭

  背景:冠状动脉粥样硬化性心脏病(Coronary heart disease,CHD)、缺血性心肌疾病是常见的心脏疾病之一。其主要的病理生理过程为冠状动脉狭窄、粥样斑块的形成、心肌细胞缺血、心肌细胞的丢失及心脏功能衰竭。CHD死亡原因多以心力衰竭引起。目前临床治疗是以解决病变冠状动脉的狭窄、拯救残存的心肌细胞为出发点和终点。而作为心肌细胞丢失引起的后续病理变化如难治性心力衰竭则很难进行改善。能否通过心肌细胞以外的细胞来移植替代心肌梗死丢失细胞,从而改善心功能。这种心肌梗死部位的细胞学修复,已成为目前CHD治疗、研究的热点。近来有研究使用骨骼肌细胞、纤维母细胞、心肌细胞、胚胎干细胞、骨髓单核细胞等来移植修复受损的心肌组织。取得了一定的成果。但存在以下几个问题:成熟的体细胞,较难发育分化成心肌细胞、冠状血管,并与心肌产生电、机械整合。骨骼肌、平滑肌取材困难。胚胎干细胞来源及用于临床有论理学的争议。目前的焦点在于骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal Stem Cells, MSCs),能否用于受损心肌的细胞移植。目的:同种异体MSCs移植能否修复新西兰白兔心肌梗死区域,即能否在梗死区存活,能否改善心肌功能,能否转化为有心肌细胞特征的细浙江大学学位论文胞,能否转化成血管组织。材料和方法:一、实验设计1.分组:雄性成年新西兰白兔分3组:组1:实验组。心肌梗死模型+MSCS的PBS悬液注射组2:模型组。心肌梗死模型+PBS注射组3:假手术组。h、动物模型及MSCS注射移植成年雄性新西兰白兔。鉴别结扎心脏左缘支动脉,45min后开放冠脉。以模拟导联ST段改变及缺血区域苍白为结扎有效。假手术组,动脉下穿线,不结扎。MSCs细胞 5-澳脱氧尿啼陡(Brdu)标记。MSCs注射移植于心肌梗死区域。对照及假手术组,注射等量的PBS液。三、病理及兔疫组化病理取材及腊块包埋,cTn单抗加通用型PV600 Pie TureTM二抗,联苯胺(加B)显色。盐酸处理,胰酶透化。Brdu单抗加通用型 PV600 Pie TureTM二抗 AEC显色。水化封片。结果:实验组动物死亡率为16.7%,对照35.0%两者有显著性差异,P<0.05。实验组的LVIDd、LVIDS ,J’于对照组数据,EF高于对照组数据,两组有显著性差异,P<0.05。大体病理、HE染色,实验组与对照组无明显区别。兔疫组化:移植的MSCS细胞存活于实验组的心肌梗死区域。MSCS 参与了心肌梗死后新生血管(动脉、静脉、毛细血管)的形成。有部分细胞转化成心肌样细胞即。Tn(+)细胞,但仍有大量移植的MSCS细胞未能转化成心肌样细胞,存留在梗死区域,成为纤维样细胞。cTn(+)、Brdu()的细胞较多分布于梗死区与非梗死区的交界部分,说明,交界部分的条件较有利于MSCS转化成心肌样细胞。也可观察到。Tn(-)、Brdu(+)的细胞及 cTn(+)、Brdu()的细胞存在于非梗死区的中间,说明移植的MSCS细胞有较强的移行2浙江大学学位论文能力,并能在正常的心肌组织中转化成心肌样细胞。结论:结扎新西兰白兔心脏冠状左缘支的方法,可用于心肌梗死模型的制备。新西兰白兔的同种异体MSCS可存活、定居于心肌梗死区域及非梗死区域。移植的MSCS可在梗死区域转化成心肌样细胞。也可移行到非梗死区域,在此转化成心肌样细胞。也可在梗死区域参与新生血管的形成。有部分移植细胞,徘徊于心肌梗死区域,未转化为心肌样细胞和新生血管。同种异体MSCS注射移植于心肌梗死局部区域可有效减轻心肌梗死后心脏功能的变化。……   
[关键词]:同种异体;骨髓间充质干细胞;移植;新西兰白兔;心肌梗死
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江大学2003年