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大黄对腹腔感染致急性肺损伤大鼠的保护作用

雷澍

  目的与背景急性肺损伤(acute lung injury,ALI)和急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)一直是威胁人类生命的常见危重病,特别是ARDS一旦发生,治疗将非常困难。近年来,随着危重症诊治技术的发展和重症监护病房的设立,许多危重患者免于早期死亡。但随着治疗工作的继续,发生严重感染的机会增加,感染致ALI和ARDS亦随之增多。由于ARDS的治疗仍非常困难,因此在早期对ALI进行防治以免其进一步发展成ARDS甚至多器官功能不全综合征(MODS)具有非常重要的意义。近年来国内外许多学者都在积极探索预防和治疗ALI和ARDS的有效方法,但到目前为止对于ALI和ARDS仍无特效疗法。许多动物实验证明抗肿瘤坏死因子(TNF)抗体及可溶性TNF受体均可抑制TNF介导的肺损伤,但临床应用有潜在的危险性,因为TNF是介导宿主正常抗微生物免疫防御反应的重要物质,阻断其生物活性必然会影响机体的免疫功能,使各类危重病患者发生院内感染的机会增加,后者则是导致危重病患者死亡的一个重要原因。大黄是传统中草药,用于治疗疾病已有几千年历史。近几年来许多学者对大黄进行了大量的药理学研究和试验,发现它有多种药理作用,诸如泻下、抑菌等作用。尤其在危重症中,它在防治急性应激性胃肠粘膜病变、全身炎症反应综合症(SIRS)和MODS等方面效果显著。陈德昌等研究发现大黄可显著降低危重患者胃肠功能衰竭的发生,且可显著降浙江大学硕士毕业论文低MODS伴胃肠衰竭者血中M-Q、白介素一6(IL-6)的水平。虽然ALI的机制迄今未完全阐明,但己经确认它是SIRS的一部分。既然大黄对SIRS和MODS具有一定的治疗作用,那它对ALI很可能也具有一定的保护作用。对此,国内有些学者用大黄对脑外伤继发ALI、肠缺血再灌注致ALI和内毒素致ALI分别进行了研究,并得到了肯定的结果。但用大黄对腹腔感染致ALI进行研究到目前国内外仍未见报道。而严重感染所致的脓毒症目前被认为是ALI和ARDS最常见和最重要的原因。目前,对ALI的研究大多采用大剂量内毒素短时间内经静脉、气管、腹腔等途径注人,短则数十分钟,长不超过数小时,以获得典型的ALI或AapS资料,但该类模型不能反映感染致肺损伤的渐进性形成过程。而腹腔感染致ALI模型所致肺损伤与临床感染致肺损伤的渐进性过程较为接近。同时,由于大黄具有较强地对肠粘膜屏障的保护作用和对肠道内细菌和内毒素的清除作用,直接用内毒素进行ALI实验将很可能使大黄的这种保护作用无法得到充分的体现。本动物实验研究就是要根据大黄的药理作用特性,采用随机对照方法,通过灌胃给予大黄的方式,观察其是否对腹腔感染致ALI动物模型具有保护和治疗作用,并进一步探讨大黄的作用机制。材料与方法1.实验分组及模型制备采用健康、性成熟的即p-Dawley大鼠30只,雌雄不限,体重250~3509,于浙江中医学院实验动物中心以清洁级喂养。大鼠随机分成三组(A、B和C组),每组10只大鼠,A组为正常对照组;B组为肺损伤组;C组为大黄治疗组。所有大鼠实验开始前12h禁食不禁水。B组和 C组每只大鼠按盐酸氯胺酮 100mg/kg腹腔注射麻醉后,开腹找到盲肠,用18号针穿孔造成腹腔感染。其后,将盲肠放回腹腔,缝合腹部切口。C组每只大鼠按 200mg/kg剂量,以 10%生大黄液(浙江省中医院提供)稀释至 lml于术后即刻、12h、24h、36h共四次灌胃给予;A组和B组以生理盐水lml于术后即刻、12h、24h、36h共四次灌胃给予。2.实验观察指标及检测方法于术后48h每只大鼠按氯胺酮100mg/kg腹腔注射麻醉,然后按20wi尾静脉注射1.3.浙江大学硕士毕业论文%伊文思蓝液,同时记录时间。30min后打开胸腔,暴露心肺,右心抽血处死动物。结扎右支气管,取右肺分别作湿肺标本、肺毛细血管通透性标本和病理标本。按照每次lml灌洗液量进行支气管肺泡灌洗5次,回收灌洗液,作BALF细胞分类。门).一般情况:实验中常规观察各组大鼠的精神状态、活动情况、进食、大便等情况。(2)肺毛细血管通透性的检测:取肺组织浸泡在甲酚胺分析纯中,温箱中温育后取出组织,离心后取上清液,于分光光度计在620urn和740urn下测吸光度值,校正公式为:E620evans”E620一门.426 X E740+0刀30)。根据标准曲线查出伊文思蓝液浓度,再计算出肺组织中伊文思蓝的含量。(3).BALF细胞分类计数的检测:BALF离心后取沉淀物涂片,染色,按其形态特征进行分类计数,求出各类细胞所占比值。(4).肺组织湿重与干重比值的检测:取肺组织滤纸吸干表面液体,称湿重;然后置于 80oC=I=燥箱烘干 48h去除水分,再称干重,计算湿干重比值。(5).病理组织学检查:取肺组织病理标本,经10%甲醛固定,石蜡包埋切片刀E染……   
[关键词]:急性肺损伤;保护作用;伊文思蓝;肺组织病理;多器官功能不全综合征;内毒素;ALI;肺毛细血管通透性;白介素
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江大学2003年