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IMS-PCR检测番茄细菌性斑点病种子带菌研究

张卉

  番茄细菌性斑点病是一种严重影响番茄产量和品质的病害。这种病害由丁香假单胞杆菌番茄致病变种(PST)引起。种子带菌是田间主要初侵染源之一,也是病害从一年传染到下一年的原因,还是病害从一个地区传染到其它地区的原因。因此制定快速可靠灵敏的种子带菌检测方案尤为重要。本研究在中国农科院植保所国家重点实验室进行,所做的工作在国内是首次进行的。采用两种方法制备得到两种抗原,分别对应两种注射方法,得到三种血清:抗PST全菌体血清、抗PST2844-87血清和抗PST18血清。用试管凝集法测定了所得血清的效价:抗全菌体血清效价为640,另外两种血清效价为1280以上。用ELISA检测所获抗体的专一性,三种血清的专一性基本相近,抗18血清交叉反应最少,抗全菌体血清交叉反应在其次,假阳性反应最多的是抗87血清。提取了供试74种细菌的基因组DNA,确定了检测PST的PCR条件;得到能够扩增两个特异基因片段的引物,引物对p1、p2和引物对p3、p4。引物p3、p4扩增的基因特异性较强,可以供检测用,而引物p1、p2所扩增的基因片段的特异性较弱,可作辅助检测用。制备得到了具有磁心的琼脂糖微球载体,保存于4℃。进行了抗血清IgG的粗提。将上述实验结果应用于种子带菌检测。在实验中设定不同梯度的人工接菌浓度,其中ELISA的检出临界值是1%。PCR的检出值是0.1%。……   
[关键词]:番茄细菌性斑点病;种子带菌;检测;抗血清;PCR
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北农业大学2003年