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日本血吸虫重组亚单位疫苗的研究

罗秀菊

  目的为寻找有价值的血吸虫疫苗候选抗原分子,本课题从候选基因筛选、克隆和表达及免疫保护性评价方面进行了初步探索。方法1 用日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原(SjHmAg)免疫兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,并对阳性克隆的插入片段进行PCR扩增及测序,利用互联网对测序结果进行同源性比较分析,并预测蛋白质结构与功能;2 将SjCAI基因亚克隆至pCEX-5X-3载体,分别将此重组质粒pGEX-SjCAI,以及本室已构建的重组质粒pGEX-Sj31b、pGEX-Sj31c转化感受态大肠杆菌ER2566,在IPTG诱导下进行表达,分别将表达产物免疫小鼠,并观察免疫保护效果。结果1 经三轮筛选,获10个阳性克隆,对其中3个阳性克隆测序的结果显示,1个与Sj原肌球蛋白基因序列显著同源,另两个为新基因片段,命名SjHm1、SjHm2;2 构建了重组质粒pGEX-SjCAI,在大肠杆菌中高效表达了融合蛋白SjGST-CAI、SjGST-31b和SjGST-31c,分别将其免疫小鼠,诱导产生了29.87%、22.71%和13.6%的减虫率,减卵率分别为63.74%、54.21%及45.01%。结论1 SjHml、SjHm2编码蛋白有可能作为血吸虫病疫苗候选抗原分子,其免疫保护作用有待进一步研究;2rSjGST-31b、rSjGST-31c能诱导部分抗日本血吸虫免疫保护力,而rSjGST-31b的免疫效果优于rSjGST-31c;3 SjCAI基因亚克隆至pGEX-5X-3载体后可在大肠杆菌中高效表达,表达产物rSjGST-CAI具有明显的抗生殖免疫力和较好的抗尾蚴攻击感染的保护性免疫,有望成为血吸虫病疫苗新的候选抗原分子。……   
[关键词]:日本血吸虫;克隆;表达;免疫保护
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中南大学2003年