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RhGM-CSF对化疗所致口腔粘膜损伤的防治作用及机理的探讨

钟大平

  目的:为了克服恶性肿瘤化疗造成粘膜损伤的严重并发症,本研究首先建立氨甲喋呤致小鼠口腔粘膜损伤模型,观察rhGM-CSF对实验性小鼠口腔粘膜损伤的防治作用,评价rhGM-CSF对临床化疗后口腔溃疡的疗效,并进一步探索rhGM-CSF促进口腔粘膜炎及溃疡愈合的作用机制。方法:1.动物实验按照随机分组的原则将501只小鼠分为8大组:对照组、MTX小剂量组、IDMTX组、MTX大剂量组、IDMTX+GM0组、IDMTX+GM2组、MTX40+CF组、MTX40+CF+GM0组。对照组小鼠一次性腹腔注射生理盐水0.5ml,其余各组行一次性腹腔注射不同浓度MTX 0.5ml;IDMTX+GM0和MTX40+CF+GM0组在用MTX同时行皮下注射rhGM-CSF(0.3ml,5μg/kg.d);MTX40+CF和MTX40+CF+GM0组在用MTX 12小时后腹腔注射CF(0.5ml,15mg/m2.d);IDMTX+GM2组在用MTX后第2天皮下注射rhGM-CSF 0.3ml;CF及rhGM-CSF连续使用5天,每日一次。注意潜行穿刺,勿注射过深。从注射MTX或生理盐水后第1天开始杀鼠,每组每天杀2~6只,计划10天将全部昆明小白鼠断颈处死,仔细解剖取下舌、口腔颊部及唇部粘膜,用10%福尔马林固定12~24小时后切片,在光学显微镜下观察小鼠口腔粘膜的病理改变。2.临床实验选择我院血液科住院病人79例,均在化疗后有不同程度的口腔粘膜溃疡。将其随机分为治疗组(39例)和对照组(40例),分别用rhGM-CSF贴片和普通贴片贴敷口腔溃疡面,观察口腔溃疡愈合情况。3.体外实验用体外培养的3~8代的胎儿口腔粘膜成纤维细胞,接种于24孔培养板4×10~3/孔,置于37℃、5%C0_2、饱和湿度的孵箱中培养12h,待细胞贴壁后吸出原培养液,加入含不同浓度rhGM-CSF的RPMI-1640,设置rhGM-CSF 0、10、50、80、100、150ng/ml浓度组,继续培养6天,每隔2天换液并加入与前面相同浓度的细胞因子,每实验点复种3孔,用成纤维细胞计数和3H-Tdr掺入法研究不同浓度rhGM-CSF在第2、4、6天对成纤维细胞的增殖及DNA合成的影响。4.统计学处理用统计程序包SPMR进行多个率之间的比较,用x2检验进行两个率之间的统计学处理。结果:1.中剂量MTX(20~40mg/kg)可引起较高的小鼠口腔粘膜损伤病变率(63.0%)和积分率(19.4~56%),且死亡率较低(小于5%)。2.注射中剂量MTX的同时或延迟2天皮下注射rhGM-CSF组的小鼠口腔粘膜损伤病变率(30.53%和30.99%)和积分率(19.47%~11 17.25%)比单用中剂量MTX组(55.56%~11 36.31%)明显减少,且溃疡严重程度较轻,二者有显著差别。IDMTX+GM0组小NNh2比例最低(2.11%)。在注射MTX(40mg/kg)的同时用CF和/或rhGM-CSF所出现的口腔粘膜病变率比单用MTX(40mg/kg)减低,且溃疡严重程度减轻,二者相差显著(P<0.01)。3.治疗组39例血液系统肿瘤化疗后口腔溃疡患者用rhGM-CSF贴片治疗3天有效率89.7%,对照组40例此类患者用普通贴片治疗3天有效率32.5%,两组疗效相差非常显著(p<0.001)。4.不同浓度rhGM-CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞的增殖及DNA合成有刺激作用,在80~100ng/ml时成纤维细胞生长达到最佳状态,过高浓度rhGM-CSF的刺激作用反而下降。结论:1.中剂量MTX(20~40mg/kg)可以形成较高的小鼠粘膜损伤率,且死亡率较低,可用于MTX粘膜损伤研究。2.rhGM-CSF可以减少MTX所致口腔粘膜损伤及促进粘膜损伤恢复。3.rhGM-CSF可以用于治疗恶性肿瘤化疗后的口腔溃疡。4.rhGM-CSF能在体外促进胎儿口腔粘膜成纤维细胞的增殖及DNA合成。本实验条件下,最佳浓度为80~100ng/ml。5.rhGM-CSF可全身或局部给药用于治疗化疗后口腔粘膜损伤。……