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玉米温敏型核雄性不育基因的差异表达

刘艳鸣

  玉米是我国三大粮食作物之一,由于我国玉米种植面积不可能进一步扩大,玉米增产只能靠单产产量的增加。就研究现状而言,利用雄性不育系生产杂交种是进一步提高单产的主要途径。由于目前对玉米雄性不育的遗传机理缺乏足够的了解,使得对玉米雄性不育系的利用往往会碰到一些致命性问题。本研究旨在分离与核雄性不育相关的差异cDNA片段,为克隆全长基因、分析其功能及遗传机理奠定基础。本研究首先对琼42Qms和琼42各分化时期的雄穗进行跟踪解剖、显微观察,并观察相应植株的叶片数,最后确定当可见叶为11-13片叶,展开叶为7.5-8.8片时琼42Qms和琼42的雄穗处于小花分化期,取材即依据以上数据进行。提取琼42Qms和琼42小花分化期雄穗的总RNA,纯化得mRNA,以琼42Qms的mRNA作检测样本(Tester)、琼42的mRNA作参照样本(Driver)进行抑制扣除杂交,其产物进行克隆得差减文库。从文库中挑取22个白色菌落,提质粒、酶切鉴定,其中有20个菌落中有插入片段,为阳性菌落。从20个阳性菌落中取10个提质粒、酶切,用低熔点琼脂糖凝胶回收酶切片段,DIG标记,作探针;与琼42Qms和琼42的小花分化期雄穗总RNA进行杂交,获得—个仅在琼42Qms中特异表达的差异cDNA片段。以该片段作探针与琼42Qms小花分化期、抽穗成熟期的叶片和雄穗的总RNA进行杂交,结果表明,该片段只在小花分化期的雄穗中表达,说明该片段可能与育性有关。对该片段进行测序,所得序列在Genebank库中进行同源性检索,得知该序列在Genebank库中无同源序列,用PC-gene软件分析得知该片段包含一个基因的部分阅读框架,是个新基因片段。……   
[关键词]:琼42Qms;琼42;温敏型核雄性不育;抑制扣除杂交;差异片段
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华南热带农业大学2002年
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