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小续命汤对大鼠前脑缺血海马CA1区神经元的保护作用及机理研究

朱心红

  目的 探讨小续命汤对大鼠前脑缺血后海马CA1区神经元的保护作用及其机制。方法 用Pulsinelli四血管闭塞法制作前脑缺血模型。实验动物随机分为11组,分别是:(1)正常组、(2)缺血3天组、(3)缺血7天组、(4)生理盐水缺血3天组、(5)生理盐水缺血7天组、(6)低剂量缺血3天组、(7)低剂量缺血7天组、(8)中剂量缺血3天组、(9)中剂量缺血7天组、(10)高剂量缺血3天组、(11)高剂量缺血7天组,每组n=6只。分别于缺血后3天、7天处死,制作石蜡切片,进行cresyl violet染色,光镜下观察CA1区组织病理学变化,并用显微测微尺测量CA1区存活的锥体细胞密度(锥体细胞的个数/毫米);取正常组、生理盐水组、高剂量组分别于缺血后24h、48h处死,冰冻切片,TUNEL染色和免疫组化。结果 (1)cresyl violet染色:低剂量组对缺血/再灌流海马CA1区神经元无明显的保护作用(p>0.05);中剂量、高剂量组有明显的保护作用;且呈剂量依赖性(缺血3天各组,相关系数r=0.877;缺血7天各组,r=0.836,p均<0.001)。(2)TUNEL染色:光镜下,缺血/再灌流24h后,正常组、生理盐水组CA1区未见TUNEL染色阳性锥体细胞。缺血/再灌流48h后,生理盐水组CA1区大部分锥体神经元TUNEL染色阳性;给药组缺血/再灌流24h、48h后CA1区均未见阳性锥体细胞。(3)免疫组织化学染色,结果显示:不加一抗的各组均无阳性染色。正常组,海马CA1、CA3、DG各区未见Caspase-3阳性锥体细胞以及Bcl-2的表达,但均可见Bax的轻度表达。缺血/再灌流24h后,生理盐水组CA1区有少部分Caspase-3阳性锥体细胞,CA3、DG区无Caspase-3阳性锥体细胞:给药组各区无Caspase-3阳性锥体细胞;生理盐水组、给药组,海马CA1、CA3、DG各区均可见Bax、Bcl-2的表达,但无明显差异(P>0.05)。缺血/再灌流48h后,生理盐水组CA1区Caspase-3的激活在数量、程度上均明显高于缺血/再灌流24h后;给药组CA1区Caspase-3的激活明显受到抑制(y1{理枯水组比卜=().()()l);生理始水织CAI区BC卜2表达下调(-‘j同组CA:{、D(扭、、给药组各K比,I‘<().()5):给药组“ l区h l-2的表达明显高十牛理盐水组,但组内各区IlclZ的表达尤差别;给药组Bax的表达‘亏牛理盐水组无差异。结论1).小续命汤对前脑缺血模型海马m门汀神经元具有明显的保护作用,显著降低大鼠前脑缺血/再灌流后海马迟发性神经儿死亡,抑制细胞凋广可能是其机制之一。2).小续命汤可能通过抑制caspase-*的激活、上调BclZ的表达,从而抑制海马CAI区的神经细胞凋l‘:。3X祛风法在脑卒中急性期的治疗冉。可能具有重要价值。……   
[关键词]:小续命汤;祛风法;海马;缺血;凋亡;caspase-3;Bcl-2;Bax;大鼠
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第一军医大学2002年