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农杆菌介导铁相关基因转化苹果的研究

黄晓德

  本研究通过研究影响农杆菌介导苹果遗传转化的因素,确立了嘎拉苹果叶片再生的优化体系,建立了嘎拉苹果农杆菌介导的高效遗传转化再生体系,并以铁贮藏蛋白基因(Ferritin)为目的基因,利用农杆菌叶盘法转化受体材料,获得了具有果实富集铁特性的苹果新种质。结果如下:1.通过分析培养基、激素、暗培养、叶片放置方式对嘎拉叶片再生的影响,确立了嘎拉苹果叶片高效再生体系,在含BA4.0mg/L,NAA0.2mg/L的MSB5培养基上,以叶片远轴端接触培养基,经过15-20天的暗培养获得再生不定芽和再生植株,再生率达100%。2.在嘎拉苹果转化体系中,头孢霉素浓度为300mg/L时适于作为嘎拉遗传转化的抑菌抗生素。4-5分钟的农杆菌的浸染时间较为合适。2-3天的共培养有助于提高嘎拉转化外植体的Cus瞬时表达率,同时也保证了有较高外植体的再生率。共培养后延迟2天进行筛选有利于提高农杆菌的转化再生率和外植体的Gus的瞬时表达率,从而建立起农杆菌介导苹果遗传转化再生体系:以含BA4.0mg/L,NAA0.2mg/L的MSB5为基础培养基,以嘎拉叶片为外植体材料,经农杆菌浸染5分钟,共培养2天,然后维持培养2天后,再进行Km20mg/L选择压的筛选;经过2-3次的继代筛选,获得抗性芽、苗后,进行扩繁,生根。3.通过实验获得转Ferritin基因的嘎拉苹果和粉红908番茄植株,转Irt基因的八棱海棠及维多利亚烟草植株,并进行了Gus组织染色、PCR、PCR-Southern检测,证实外源基因已整合到转化植株的基因组中。……   
[关键词]:苹果;Ferritin基因;遗传转化;农杆菌介导;
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2002年
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