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猪垂体中卵泡抑制素受体的分析

杨灿锋

  本实验以青年母猪和雌性大白鼠为实验动物,应用激素微量生物活性测定技术、细胞培养技术、放射免疫测定技术、放射受体分析技术等,鉴定了本研究室提纯的抑制素(inhibin)生物活性,并以之为配基确定青年母猪和雌性大白鼠腺垂体细胞中抑制素受体的存在与否。主要内容如下:1.猪卵泡液提取物的纯度和抑制素生物活性鉴定本实验旨在鉴定猪卵泡液提取物的纯度、蛋白亚基分子量是否和抑制素亚基分子量相近、以及猪卵泡抑制素的生物活性,以确定猪卵泡液提取物的主要成分。采用垂直板SDS——聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法,对猪卵泡液提纯物进行电泳。结果发现,待测样品只有两条带,说明猪卵液提取物的纯度比较高。与标准蛋白对照,确定猪卵泡液提纯物(亚基)的分子量分别在17-18kDa和14-15 kDa之间,这与抑制素的两个亚基α(分子量为18kDa)和β(分子量14kDa)极为相近。在无血清培养基中添加不同浓度的猪卵泡液提取物,培养性成熟前猪和大白鼠的腺垂体细胞,运用放射免疫测定方法测定培养液中促卵泡素(FSH)的含量。发现猪卵泡液提取物对猪腺垂体细胞分泌促卵泡素有明显的抑制作用,并呈剂量依赖关系,从而确定本实验室提纯的猪卵泡液提取物有抑制素生物学活性。2.抑制素受体分析本实验以猪和大白鼠两种动物为实验对象,研究猪卵泡抑制素在猪和大白鼠腺垂体细胞上的受体。用Bradford法测定细胞膜蛋白质浓度,膜蛋白最终浓度控制在1mg/ml以上。用放射受体法分析表明,在猪的腺垂体细胞上存在抑制素特异性结合位点,解离常数K_D为7.6×10~(-8)Mol/L,最大结合量R_(max)为50300fmol/g蛋白。而在大白鼠垂体细胞中,最大结合管(B_(max)管)的放射性小于非特异性结合管,说明大白鼠的腺垂体细胞中没有可与猪卵泡抑制素结合的受体。以上结果表明,本实验室提取纯化的猪卵泡液提取物主要成分是有生物学活性的抑制素;猪的腺垂体细胞中有猪卵泡抑制素受体,而在大白鼠腺垂体细胞中没有发现能与猪卵泡抑制素结合的受体。……   
[关键词]:抑制素;受体;生物活性鉴定;大白鼠;
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2002年