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新城疫病毒F蛋白七肽重复序列区的亚克隆、表达、纯化及结构分析

吴庭鹤

  副粘病毒科病毒的膜融合是由其表面糖蛋白,F蛋白介导的。新城疫病毒(NDV)感染宿主细胞,首先是引发病毒囊膜与细胞膜融合,随后导致病毒遗传物质释放入宿主细胞。深入研究病毒与细胞的融合机制有助于开发新型的抗病毒药物。现已证实,多数副粘病毒,包括其他囊膜病毒如HIV和RSV,F蛋白N-端和C-端各有一段七肽重复区,称为HR1和HR2。二者对病毒与细胞膜的融合过程起着重要作用。其他囊膜病毒的两个七肽重复序列可以形成一种异源三聚体结构,称为coiled-coil。它在病毒介导的融合过程中起关键作用。但仍不清楚NDV是否有与其它病毒相同的融合机制。在本实验中,我们克隆、表达了融合形式的HR1LinkerHR2(HR1,2)蛋白,并将融合形式和除去融合蛋白的HR1,2纯化。化学交联实验和分子筛纯化结果表明,HR1,2可以形成同源三聚体结构。圆二色谱(CD)结果显示,HR1,2在208nm和222nm有明显的双负峰,具有明显的α螺旋结构特征,且其具有高度的热稳定性。这表明由HR1,2形成的同源三聚体具极稳定的。螺旋结构形式。NDV病毒也可能通过形成coiled coil形式介导融合。NDV与其它囊膜病毒不同的是,在HR1和HR2序列之间间隔250个氨基酸。Ghosh等人已证实,HR1和HR2之间还有另外一个七肽重复序列区,称为HR3。单氨酸突变实验表明,HR3序列的单氨酸突变可以改变NDVF蛋白在引发合胞体形成实验中对HN蛋白的依赖性。为进一步研究HR3的结构和功能,我们克隆、表达了融合形式的HR1,3LinkerHR2(HR1,3,2)蛋白,并对His-tagged HR1,3,2进行了纯化。……   
[关键词]:新城疫病毒;七肽重复序列;融合蛋白;卷曲型α螺旋结构
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北农业大学2002年