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兔肝锌金属硫蛋白(MT)的诱导方法和制备工艺研究

徐丽霞

  目的:为了提高制备MT的产率,研究在家兔体内合成MT的诱导方法和从兔肝中提取MT的最佳工艺及MT的分离纯化方法。方法:1.用青紫兰家兔s.c.硫酸锌和地塞米松磷酸钠诱导其肝脏合成MT,以原子吸收法(AAS)测定肝锌含量。2.以紫外分光光度法(UV)和AAS法分别测定提取液的巯基活性和锌含量为指标监测MT,采用L_9(3~4)型正交设计,探讨最佳提取工艺。采用凝胶色谱法与阴离子交换法分离纯化MT。3.用液质联用检查MT纯度和测定分子量。用UV法和AAS法测定MT产品的含量。结果:1.该诱导方法能使兔肝锌含量明显增加,且硫酸锌和地塞米松磷酸钠具有显著的协同作用(P<0.01。2.已获得一种提取MT的合适工艺。3.色谱法分离纯化得到了MT的两种型体MT-Ⅰ和MT-Ⅱ;测得其分子量约6500D。MT-Ⅰ和MT-Ⅱ用反相HPLC进行梯度洗脱未能分开。4.在凝胶色谱法分离MT时,用NH_4HCO_3代替Tris,产品无需脱盐就可直接冻干,简化了纯化步骤。5.测得由5次硫酸锌诱导的兔肝中MT的产率为2.9mg/g湿肝,产品MT纯度约90%。结论:1.硫酸锌和皮质激素共同诱导可提高MT的合成率。2.提取液的浓度、温度、用量及醇水比例均影响MT的提取率。3.凝胶色谱分离MT时,NH_4HCO_3可代替Tris。4.本法制得的兔肝MT的分子量与文献值一致。5.本制备方法适于MT的实验室制备。……