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甜樱桃矮化砧木离体叶片再生及抗菌肽MB39基因转化植株的获得

黄文江

  樱桃是一种极具市场潜力的水果。樱桃根癌病,细菌性流胶病等细菌病害是世界樱桃产区广泛发生的病害,感染细菌性病害严重的造成树体死亡,因此选育抗病品种来解决樱桃因细菌感染而造成的问题具有重要的经济意义。本研究的目标就是研究建立樱桃离体叶片不定芽再生体系,并利用天然的植物转基因系统——根癌农杆菌,以甜樱桃矮化砧木Gisela6叶片为外植体,把抗菌肽MB39基因转入樱桃砧木,获得抗根癌病的植株,培育新的抗病品种。试验研究了基本培养基、激素配比、蔗糖浓度、外植体成熟度及切割方式以及培养基添加物等影响樱桃离体叶片不定芽再生的因素,优化了再生条件,建立起了高效、稳定的离体叶片再生体系。结果表明,WPM的基本培养基在诱导樱桃离体叶片再生方面明显优于MS、B_5、N_6。合适的激素配比及浓度是提高离体组织再生不定芽频率的关键。IBA比NAA有更强的诱导樱桃叶片再生的活性;外植体的基因型显著影响不定芽再生,Gisela5和Gisela6的再生频率较高,可达70%以上,马哈利樱桃,中国樱桃和甜樱桃离体叶片也可再生但再生频率较低;分化培养基中添加AgNO3和CH,能够促进不定芽的再生;黑暗诱导处理也影响再生,接种后,黑暗15d,再生频率最高。在WPM+BA7mg/L+IBA0.3mg/L+AgNO3 4.5mg/L+CH300ppm和WPM+BA5mg/L+IBA0.5mg/L+AgNO3 4.5mg/L+CH300ppm培养基上,Gi-sela5,Gisela6的再生频率最高,分别为76.8%和100%。在建立的再生体系基础上,利用Gisela6作试材,研究了樱桃转化过程中抗生素、预培养和共培养等因素对转化效率的影响,建立了高效的遗传转化系统。取新展开的幼嫩叶片接种于诱导培养基上预培养1d,用携带目的基因的农杆菌EHA105浸染30min,然后放置到添加20μM AS的诱导培养基上共培养3d,脱菌后,移入筛选培养基(WPM+BA5mS/L+IBA0.5mZ/L+AgNO3 4.5mg/L+CH300ppm+Carb250mR/L+Cef250mg/L+Kan50mg/L)。获得抗性植株进行生根和叶片Kan抗性检测。对上述所得抗性植株进行PCR检测,结果表明,MB39基因已整合到植株的基因组中。……   
[关键词]:樱桃;矮化砧木;离体;抗菌肽;MB39基因;农杆菌;基因转化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:西北农林科技大学2002年
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