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补肾活血液对成骨细胞影响的实验研究

舒晓春

  目的:观察补肾活血液对体外培养新生SD大鼠成骨细胞增殖、分化、矿化的影响,以探讨其防治骨质疏松症的疗效机制。为该方的进一步开发研究提供实验理论依据。方法:①成骨细胞的培养:采用二次酶消化法从新生SD大鼠颅骨获取成骨细胞,进行原代培养、传代培养,取第3代细胞为实验模型,将不同浓度的补肾活血液与分离培养制得的新生大鼠颅盖骨第3代成骨细胞共同培养。②成骨细胞的鉴定:使用倒置相差显微镜,直接观察新生SD大鼠成骨细胞生长的形态学改变,以及采用改良Gomori氏钙钴法,进行碱性磷酸酶染色,后镜下观察。③细胞增殖功能测定:用MTT法(用波长570nm处OD值表示)。④细胞分化功能测定:用PNPP法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;用骨钙素放免分析方法测定细胞培养液中的骨钙素含量。⑤细胞矿化功能测定:用茜素红染色法,在40倍光镜下作矿化结节计数(用每视野矿化结节数量表示)。结果:①采用二次酶消化法,进行体外细胞培养,可获得比较纯化的成骨细胞。②不同浓度(20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml0)的补肾活血液能够促进体外培养的成骨细胞数量增加,且促进作用与药物浓度呈剂量依赖性、时间呈正相关。③补肾活血液能促进成骨细胞合成分泌碱性磷酸酶,且剂量依赖性地增加成骨细胞骨钙素的分泌。④补肾活血液具有刺激成骨细胞增加矿化结节数量的作用。结论:①补肾活血液可促进体外培养的成骨细胞增殖,提高细胞增殖率。②补肾活血液能促进成骨细胞进一步分化成熟。③补肾活血液能够促进体外培养的成骨细胞矿化形成。④补肾活血液可通过提高体外培养的成骨细胞的骨形成。……   
[关键词]:补肾活血液;SD大鼠;细胞培养;成骨细胞;增殖;分化;矿化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:暨南大学2002年