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转基因水稻中Bt蛋白ELISA检测方法的建立及检测

秦崇涛

  抗虫转基因植物研究及其产业化的飞速发展对其检测方法提出了更高的要求。目前应用的主要检测方法主要可分为三类:生物测定(实验室及田间测试)、DNA水平的测试法(PCR、Southern blotting)和蛋白质水平的测试法(ELISA、Western blotting)。这些方法各有特点,相比之下,ELISA因其快速、简便、准确而成为最理想的方法。本实验的目的就是建立一套快速、有效、方便并且能够定量检测转基因水稻中Bt含量的方法。首先,用细菌中分离的纯品CryIA(e)蛋白作为抗原对新西兰白兔进行免疫,成功制备出了效价较高的CryIA(e)蛋白抗体,并且用戊二醛一步法对纯化的IgG进行了碱性磷酸酶标记。实验中进行了直接法、间接法和双抗夹心法等ELISA方法检测转基因水稻中Bt的含量,证明双抗夹心法是一种比较理想的方法;同时确定了双抗夹心法的各项具体条件。应用所建立的检测方法对大量的转基因水稻样品进行了Bt含量的检测,证明转基因样品中Bt含量与其抗虫性是相关的,未发现有假阳性;同时进行了转基因水稻中Bt表达时空性变化的检测,证明在转基因水稻中Bt的表达量在不同的时期与不同的器官中均会有所变化;并且经常会遇到转基因沉默现象。……   
[关键词]:转基因水稻;ELISA;Bt蛋白
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:福建农林大学2002年