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农杆菌介导获得转双价抗虫基因籼稻及其后代的初步研究

翟红利

  近年来转Bt抗虫基因植物已经在生产上得到了广泛的应用。但随着抗虫转基因植物的大规模种植,其抗虫谱相对狭窄及害虫易产生抗性等问题也越来越得到人们的关注。因此,以转双价或多价抗虫基因植物为代表的第二代抗虫转基因植物成为植物基因工程研究中的热点之一。水稻是世界上最重要的粮食作物,随着人口增加和耕地面积的减少,进一步提高水稻产量有其重要意义。虫害是限制水稻增产的主要原因之一,利用转基因技术培育抗虫水稻可以有效解决水稻虫害问题。本研究主要进行了如下工作:1、以获得具杀虫谱更广和应用期更长的转基因抗虫水稻为目的,将两个杀虫基因即sck基因和Bt基因与标记基因潮霉素基因(hpt)构建在同一表达载体上pCUBAC-Hyg。通过电激法将表达载体转入根癌农杆菌LBA4404中。用农杆菌介导的方式转化优良籼稻恢复系明恢86的幼胚诱导的胚性愈伤组织,经过6个批次转化,共得到潮霉素抗性愈伤70个,转化率为3.22%。有53克隆分化成苗,移栽成活45个克隆(共162株再生植株)。经PCR检测和PCR-Southern杂交证明,在再生的植株中,137株转化植株中同时具有两个杀虫基因,16株只含有sck基因,9株为假阳性。2、对所获得的转基因水稻中Bt蛋白表达量进行了检测,结果表明,转基因植株所表达Bt蛋白含量占水稻叶片中总可溶性蛋白的0.05%—0.12%。通过对T_1代、T_2代株系PCR检测和ELISA检测,发现部分转基因植株基因组中虽然有Bt基因却未表达Bt蛋白,出现了转基因沉默现象。3、对所获得的转基因植株的田间抗虫性进行了调查,结果表明,大部分的转基因植株对二化螟等鳞翅目害虫有明显的抗性。4、在T_2代中获得了13个已经纯合的株系,为抗虫转基因水稻亲本的选育提供了优良材料。此外,对分离比测定中出现的无规律现象进行了讨论。……   
[关键词]:籼稻;转基因;双价基因;抗虫
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:福建农林大学2002年
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