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山茱萸提取液制备及其抗心律失常活性研究

张兰桐

  山茱萸为山茱萸科植物山茱萸的(Comus officinalis Sieb.etZucc.)干燥成熟果肉。功能为补益肝肾,涩精固脱。主治眩晕耳鸣,腰膝酸痛,阳痿遗精,遗尿尿频,崩漏带下,大汗虚脱,内热消渴。近两年研究发现,山茱萸具有抗失血性休克、抑制血小板聚集、免疫调节、抗炎、降血糖、抗氧化、抗癌、抗菌等作用。山茱萸含有环烯醚萜苷类、有机酸和挥发油等多种化学成分。据文献报道,山茱萸中马钱素(loganin)是心血管活性物质,马钱素为总苷中的主要成分和主要有效成分。我们在研究抗失血性休克作用的预实验过程中,发现山茱萸提取液具有明显的抗心律失常活性。因此,我们对山茱萸进行系统分离,制备不同组分的提取液,考察其理化性质,建立起分析方法和质量标准。在临床药理、药物作用机制研究方面,中药的药物代谢动力学越来越显示出其重要性和必要性。尤其是对中药有效成分的药物代谢动力学研究,了解其在体内的吸收、分布、代谢和消除一系列过程,对于指导临床合理用药将具有重要意义。第一部分:山茱萸提取液制备工艺与质量研究目的:研究山茱萸提取液的最佳制备工艺以及去除杂质的方法,以获得质量稳定的提取液。研究山茱萸提取液的鉴别、检查以及含量测定方法,建立质量标准,以有效控制山茱萸提取液的质量。方法:按正交试验设计,采用水提醇沉制备山茱萸提取液,以提取液的总苷含量为指标,分别考察溶剂用量、提取时间及提取次数这三个试验因素。研究除去蛋白质、多糖和鞣质的最佳条件以及确定溶液最适pH值、活性炭和阳离子交换树脂用量。I中文摘要采用系统溶剂革取法进行分离,分别制取不同组分的提取液,即总提取液、乙醚提取液、乙酸乙酯提取液、正丁醇提取液以及提取残余液。采用薄层色谱法对山莱英中熊果酸 *rsolic acid)和马钱素(logani)进行鉴另。采用电位滴定法测定总有机酸什otal oTganic acids)含量,考察精密度和稳定性试验。研究分光光度法测定总苦Ootal glycosides)的含量。取山莱英水提液,稀释后用大孔吸附树脂层析柱上吸附后再洗脱,用显色剂显色后的溶液进行光谱扫描,分别与人参二醇、桅子昔、马钱素和莫诺昔加入显色剂显色后的溶液进行光谱扫描结果比较,确定测定波长和对照品。在此条件下,考察不同温度、不同时间对显色的影响,确定显色温度和时间。取马钱素对照品配制成系列浓度的溶液以制备标准曲线绘制,并进行回收率测定和稳定性考察。高效液相色谱法狈定马钱素(loganin)和莫诺昔(morroniside)的含量。采用PE上50型高效液相色谱仪;色谱条件为KIOm肪*色谱柱N.6XI扣mm,skin);u40型二极管阵列紫外检测器,检测波长分别为马钱素237urn,莫诺#240urn;流动相为0刀smol·L”’磷酸二氢钠缓冲液-乙睛(6.4:l);流速0.smL·min”’。配制系列浓度的马钱素和莫诺昔对照品溶液,绘制标准曲线。并依法测定回收率和精密厦。分别配制对照品溶液和供试品溶液。吸取对照品溶液与供试品溶液各10vL,注入液相色谱仪,测定,记录峰面积,计算供试品溶液中马钱素和莫诺苦的含量。结果:采用三因素三水平进行考察,最佳方案为A;B人;,仇选后的最佳提取条件为水煮提取3次,每次2小时,水的用量为药材的8倍。确定了提取液的制备工艺。除躁质,调整pH值和活性炭脱色,解决了提取液的澄明度问题。采用阳离子树脂交换法除去了过量的钾离于。制订了总提取液的质量标准。建立总提取液的薄层色谱法门LC)鉴别,样品液和对照品溶液在相同位置上呈显相同颜色的斑点:制订提取液的含量测定方法,即用电位滴定法测定总有机酸,分光光度法2中文摘要测定总昔,高效液相色谱法(RP-HPLC)测定马钱素和莫诺昔的含量。采用分光光度法测定总昔,选定的测定波长为530urn。马钱素作为对照品,测定吸收度;以吸收度对马钱素浓度作图,绘制标准曲线,其回归万程为C二0.025+0二14lA,,0.9999*—5人 样品液的总昔含量为18.40mg·InL”’,RSD为1.56%;在不同温度下和放置不同时间,考察样品的稳定性,结果表明样品溶液在8小时内相对稳定。高、中、低三种不同浓……   
[关键词]:山茱萸提取液;RP-HPLC;马钱素;莫诺苷;含量测定;抗心津失常;电生理;药物代谢动力学
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:河北医科大学2002年