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人类白细胞介素15与柯萨奇病毒B3型VP1基因双表达质粒的构建及免疫作用的研究

房文亮

  目的:白细胞介素15(Interleukin-15,IL-15)是1994年由Grabstrin等在检测猴肾表皮细胞系(CV-1/EBNA)上清液中的细胞因子时发现并克隆出来,其mRNA在胎盘、骨骼肌、肾脏和活化的单核巨噬细胞中可检测到,它与白细胞介素2(IL-2)没有序列同源性,但可与IL-2受体(IL-2R)的β和γ链相互作用,表现出许多与IL-2相似的生物学活性:体外诱导植物血凝素(PHA)刺激的正常外周血单核细胞(PBMC)、自然杀伤细胞(NK)和B细胞的增殖,以及细胞毒T细胞(CTL)和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)的生成,并且IL-15还可以自分泌方式调节单核巨噬细胞分泌细胞因子,活化中性粒细胞,并延迟中性粒细胞的凋亡。IL-15还是T细胞趋化因子,因此在初始免疫反应阶段比IL-2更重要,可以促进免疫应答由初始免疫反应向适应性免疫反应过渡,增强免疫应答的强度。柯萨奇病毒B3型(Coxsackievirus B3,CVB3)是引起人类病毒性心肌炎、无菌性脑膜炎和新生儿全身性感染等疾病的主要病原体。CVB3的VP1蛋白抗原性较强,可刺激机体产生具有保护作用的中和抗体。本研究的目的为,构建CVB3-VP1/IL-15基因的真核表达重组质粒,并观察其免疫效果,为研制防治病毒性心肌炎的核酸疫苗奠定基础。中文摘要方洁:从人胚肺H倍体细胞*)中提取ILl 的InltrvA,用自行设计的人ILq 5特异性引物进行RTPCR扩增,将扩增产物与 pGEM* easy载体连接,转化 DH5a大肠杆菌,于含氨辛青霉素的ZYT培养基上筛选重组子,提取质粒进行酶切鉴定和测序。取双酶切的目的基因片断,与经过同样两种酶切的pCDNA3载体连接,经过转化、筛选和酶切鉴定后,构建成真核表达重组质粒pCDNA3JLd。用自订设计的引物从pCDNA3-VP质粒上扩增出带有启动子的VP基因,插入到PCDNA3JLl质粒上,构建成真核重组质粒PCDNA3VP /IL八,转化DH5a大肠杆菌,经大量扩增纯化后,肌肉注射免疫Balb儿小鼠,每只100fig/次,共注射3次。每次免疫后的第六大,断尾取血检测CVB3 中和抗体。3 次免疫后用致死量(800TCID50)的CVB3感染小鼠,观察pCDNA3-VPI/IL八对小鼠的免疫保护作用。结果:构建的pCDNA3-VP /ILl 5重组质粒目的基因与CVB3.VP 禾ILl 5 的标准序列 相 同;pCDNA3NP /IL刁 5重组质粒免疫小鼠后,能诱导机体产生中和抗体,各次免疫后抗体滴度分别为<:5、1:8尸和140。用800TCID50 CVB3感染小鼠,pCDNA3-VPI/IL-15重组质粒免疫组、pCDNA3-ILq+PCDNA3N、pCDNA3JLJ、pCDNA3-VP重组质粒对照组、pCDNA3质粒对照组及生理盐水对照组,ZI大生存率分别为35%、30O、100、25o、15o、10O,经X’检验,6组小鼠生存率无明显差异T列.05入结论:本研究成功地构建了人白细胞介素15基因重2中文摘要组真核表达质粒pCDNA3-ILl;首次构建了柯萨奇病毒VPI 基因和人白细胞介素15 基因双表达质粒pCDNA3-VPI /IL。15;用pCDNA3-VPI /IL-15、pCDNA3-IL-15+p。DNA3-VPI、pCDNA3-VPI、重组质粒肌肉注射免疫雄性46周龄BALB儿小鼠,三周后检测到了低水平的中和抗体,抗体滴度随免疫次数增加而提高;用致死量的CVB3(800TCID50)攻击pCDNA3-VPI/IL-15免疫三周的雄性46周龄BALB儿 /J’鼠,诱导机体产生的抗体不能保护小鼠抵御CVB3的攻击。推测延长免疫时间,可增强本基因疫苗的免疫应答。……   
[关键词]:白细胞介素15;pcDNA3;pcDNA3-VP1/IL-15质粒;柯萨奇病毒B组3型;免疫应答;小鼠
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北医科大学2002年