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转化生长因子α及其受体在多囊卵巢综合征和正常大鼠中的表达

张娜

  目的:本研究利用多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型,通过观察转化生长因子α(TGF-α)及其受体(表皮生长因子受体,EGFR)在多囊卵巢及正常卵巢中的表达、测量PCOS及正常大鼠血清中TGF-α的水平,探讨全身与局部之间的联系以及PCOS与正常大鼠间的不同,综合判断TGF-α及其受体在PCOS发病中的作用,从整体水平、细胞水平综合分析局部调节因子在PCOS卵泡发育失败中的作用。材料与方法:选24日龄未成年雌性SD大鼠60只,随机分成两组,每组30只。其中一组建立PCOS模型作为实验组。两组大鼠均于36日龄断头处死,取血,2000r/min离心20min,收集血清样品,测定TGF-α水平。取出双侧卵巢,每组各留三只卵巢以4%戊二醛固定行透射电镜检查。其余每只卵巢均以10%福尔马林固定,做成石蜡包块测定TGF-α及EGFR的表达。血清TGF-α的水平用放免(RIA)测定,抗体为兔抗人TGF-α蛋白的多克隆抗体(北京华英生物技术研究所产品),用~(125)I标记,灵敏度及特异性较高。卵巢中TGF-α及EGFR的表达用免疫组化(IH)方法测定,TGF-α免疫组化的一抗是小鼠抗人TGF-α蛋白抗体(美国CALBIOCHEM公司产品,即用型),EGFR免疫组化的一中文摘要抗是兔抗人EGFR蛋白多克隆抗体(美国 SAN皿 CRUZ公司产品,稀释1:150后应用人免疫组化结果判断标准:同一样本至少重复染色一次,由至少两位经验丰富的专业人员独立阅片。以PBS替代一抗作为阴性对照,以细胞内出现棕黄色颗粒为阳性结果。每张切片在400倍高倍视野下随机取5个视野,计数阳性细胞数占全部细胞数的比例,染色结果按比例分为:一:阳性细胞数占10%以下:十:阳性细胞数占m刁3%;\:阳性细胞数占33~66%;牛:阳性细胞数占的%以上。统计学分析:RJA结果的数据用了士s表示,组间差异用 t检验;IH结果用f检验。所有数据均用 SAS软件包进行统计。Prto刀5为差别显著,Pwto.of 为差别非常显著。结果:PCOS组血清中TGF心的水平明显低于正常对照组(尸<00001)。两组均值:PCOS 组为13.30it4.926pg/ml,正常对照组为 32.895t8*54pg/ml。镜下发现PCOS大鼠卵巢泡膜-间质细胞的数量比正常大鼠增多。TGF-a和 EGFR在大鼠卵巢的颗粒细胞、泡膜细胞、间质细胞中均有染色。两组相比,PCOS组TGFa在颗粒细胞的染色明显比正常对照组弱(P t 0刀of人 而在泡膜细胞(P=0.508)和间质细胞(P=0刁27)中的染色强度与正常对照组无显著差异。PCOS组EGFR在颗粒细胞(P<0.00)、泡膜细胞(Pwto.001)及间质细胞(Pwt0.00)上的染色均明显比正常对照组强。观察发现,在PCOS组,卵泡愈大,TGFa在颗粒细2中文摘要胞及泡膜细胞上的染色也愈强,与正常对照组相似。但EGFR却与正常对照组不同,无论卵泡大小,在颗粒细胞及泡膜细胞上均表现强染色。正常对照组卵巢中的EGFR与TGF七类似,随卵泡的增大在颗粒细胞及泡膜细胞上的染色也增强。PCOS组TGF亿在颗粒细胞上几乎无染色,在泡膜细胞上的染色亦较弱,EGFR在这两个部位上的染色却很强。而正常对照组TGF亿及EGFR在相同部位上的染色却无类似结果,两者染色均呈中等强度。在PCOS组,TGF心在颗粒细胞、泡膜细胞、间质细胞的染色强度随部位的不同而变化(颗粒细胞<泡膜细胞<间质细胞人与正常对照组不同。在正常对照组,TGF亿在颗粒细胞、泡膜细胞上的染色强度类似,而在间质细胞上的染色要比前两个部位强。同样,EGFR的染色在两组间也有区别,在PCOS组EGFR在这三个部位均呈强染色,而正常对照组颗粒细胞及泡膜细胞上EGFR的染色均弱于间质细胞。透射电镜下观察,①PCOS大鼠:卵泡颗粒细胞核型不整,含多个核仁的胞核较多见;线粒体呈不同程度的肿胀,愈接近外层的颗粒细胞中其线粒体的肿胀愈明显,晴部分断裂甚至消失;滑面内质网减少,而扩张成池的粗面内质网增多,脂滴亦增多,电子密度较高。泡膜细胞中线粒体亦有不同程度的肿胀:并可见大量扩张成池的滑面内质网和粗面内质网,内有絮状物;脂滴增多,电子密度较高。②正常对照大鼠:卵泡颗粒细胞的细胞核规整,线粒体较小,呈杆状,具板层状椅;可见滑面内质网及核糖体。3中文摘要泡膜细胞的线粒体亦呈杆状,具板层状晴;少量的粗面内质网扩张成池;可见少量脂滴,呈中等电于密度。结论:1.本研究首次发现:①PCOS大鼠血清中TGF咀的水平明显低于正……   
[关键词]:转化生长因子α;表皮生长因子受体;多囊卵巢综合征;大鼠;表皮生长因子
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北医科大学2002年
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