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几株芽孢杆菌对杀虫苏云金杆菌菌株的增效作用研究

刘铭

  本文第1章全面考察了几丁质酶在所有苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)70个血清型的不同菌株中的分布,采用比色法完成了不同菌株几丁质酶的定性和定量分析。在检测的70个菌株中,有38株在pH7.0的诱导培养液中表现出几丁质酶活性,其中17株在pH10.0条件下仍有酶活。这说明该酶在苏云金杆菌中普遍存在,但与几丁质酶高活性菌株沙雷氏菌(Serretia marcescens)菌株相比,大多数菌株的酶活性较低。对两株几丁质酶活性较高的Bt菌株T04A001和T13003的产酶特性及生物学特性进行了研究,发现两菌株均在pH7.0时产酶量最大,分别为355 U/ml和314U/ml,无论是在酸性还是碱性诱导条件下酶产量均明显降低。以甜菜夜蛾(Spodoplera exigua)初孵幼虫为对象的生物测定表明,两菌株的诱导培养液均对苏云金杆菌菌株DL5789有明显的增效活性,增效效果分别为2.35倍和1.52倍,说明苏云金杆菌的几丁质酶同样有助于提高杀虫效果。对几株产酶菌进行PCR检测,证明其基因组中存在几丁质酶基因。部分菌株所产生的几丁质酶的SDS-PAGE与Western blotting表明,这些菌株所产生的几丁质酶分子量约为61KD,与Ha sNPV的几丁质酶有较高的同源性,推测他们可能同属于ChiA家族。本文第2章在筛选对高毒Bt菌株具有增效活性的蜡状芽孢杆菌(B. cereus)和产几丁质酶的Bt菌株的基础上,建立了一套增效菌株与高毒菌株的混合发酵技术,使其增效效果得到明显提高。通过筛选和混合发酵,发现蜡状芽孢杆菌菌株Ym2102与苏云金杆菌菌株DL5789混合发酵的增效效果最好,其发酵液对甜菜夜蛾初孵幼虫的LC_(50)仅为0.218μL/g,而DL5789单独发酵的发酵液对甜菜夜蛾初孵幼虫的LC_(50)高达1.047μL/g,增效效果为4.81倍;DL5789单独发酵的发酵液对甜菜夜蛾二龄幼虫和三龄幼虫的毒性很低,分别为2.151μL/g和4.115μL/g,而混合发酵液的对他们的毒效分别为0.387μL/g和0.743μL/g。不仅如此,混合发酵后制剂的稳定性也明显得到改善,克服了DL5789发酵液毒效不稳定、不易长期保存的缺点。混合发酵后制剂对棉铃虫(Heliothis amigera)初孵幼虫也有明显的增效效果,说明混合发酵对不同虫种都有增效作用。对混合发酵的生物学特性的研究表明,混合发酵的细菌的生长情况、pH变化以及毒力变化中国仆学写硕士研究生牛业论文儿株芽地杆菌对杀虫苏云金仟菌菌株的增效什用研穷都有别于DL5789单独发酵。YmZ102与其仙Rt菌株的混合发酵结果表明,混合发酵增效途径是广泛存在的。对混合发酵机理的初步探讨表明,菌数的增加可能是导致毒力提高的主要因素;YmZ102的发酵上清液对DL5789发酵液的毒力提高起一定的作用,但其作用机理还有待深入研究。……   
[关键词]:苏云金芽孢杆菌;蜡状芽孢杆菌;几丁质酶;增效;混合发酵;生物测定
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国科学院研究生院(武汉病毒研究所)2002年