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食管癌细胞系CSEC-215的建立及生物遗传学特性的初步研究

卢善明

  目的:肿瘤细胞遗传学研究是基因研究的细胞学基础,为肿瘤相关基因和遗传易感性的研究提供信息。许多肿瘤中存在染色体非随机性断裂,根据染色体畸变提供的信息,寻找侯选肿瘤相关基因的定位克隆策略是研究肿瘤癌变的一个重要方面。潮汕地区是我国南方食管癌的高发区,潮汕人主干历史上来源于内陆食管癌高发区河南、山西等。该地区食管癌发病的性别差异、家族聚集现象和潮汕华侨的高食管癌发病率提示遗传素质在食管癌发生中的可能作用不容忽视。由于用食管癌标本直接制备可供分析的肿瘤分裂相较困难,建立食管癌细胞系是研究食管癌细胞遗传学的重要方法。来源于潮汕地区人原发性食管癌的细胞系尚未见报道。本研究以建立潮汕地区人原发食管癌细胞系,并初步研究其一些生物学特性及细胞遗传学改变。为今后采用分子遗传学技术研究食管癌提供信息及材料,并为肿瘤治疗等方面的研究提供实验模型。方法:1标本来源:27例新鲜食管癌组织均来源于我院附属肿瘤医院胸外科行食管癌切除术患者的肿瘤。其中,仅一例来源于一位46岁潮阳籍女性食管癌患者的标本培养成功。患者临床诊断为食管中段癌(住院号:73057,X线号:117905),术前无放疗、化疗,于2001年2月15日在我院附属肿瘤医院普外科行食管癌切除术。术后病理诊断为食管中段鳞状细胞癌(I刁)级,浸润至深肌层,淋巴结无转移(病理号:137728人2食管癌细胞原代培养和细胞系CSEC毛 的建立:用胶原酶消化后?‘悬液培养法、组织块培养法原代培养新鲜食管癌组织细胞,待上皮细胞长至一定数量后,胰酶消化后传代。3 CSEC毛 的生物学特性研究:①形态学部分:倒置显微镜、光镜下观察细胞的形态、核的大小、形态,核浆比、核仁数目及细胞的生长状况。透射电子显微镜下观察细胞的形态、超微结构特点。②细胞生长动力学方面:生长曲线、分裂指数、平板和软琼脂克隆形成率、细胞贴壁率、接种率、细胞周期、低血清培养。③异种移植:SCid小鼠的接种成瘤实验,免疫组织化学检测SCid .J’鼠异种接种瘤结的细胞角蛋白KK)表达。④蛋白标记:免疫组织化学染色检测细胞爬片的CK表达,原发食管癌及培养细胞爬片的p53、HPV蛋白表达等。4 CSEC毛 的染色体分析:制备第9代、45代细胞的分裂相,胰酶消化、G显带后选择染色体分散较好的分裂相进行染色体计数,第9代共计数80个分裂相,第45代计数100个分裂相。选择质量较好的分裂相进行拍照,核型分析,两代细胞各分析12个分裂相。结果:l 食管癌组织原代培养及CSEC上 细胞系建立:食管癌组织于原2代培养第24天首次传代,此后细胞生长逐渐稳定,在体外持续生长9个多月,己传至第66代,细胞系基本建立成功,命名为CSEC-ZIS。2 CSEC-215的生物学特性:①形态特征:细胞系CSEC上 呈单层生长,生长密集处相互重叠。细胞主要呈多角形、大小不等、可见瘤巨细胞。核大染色深、核仁明显、核分裂相多见,具明显异型性。透射电镜下胞浆内可见粗大的张力原纤维束。总之,从形态上具有鳞状细胞癌的形态特征。②细胞生长动力学方面:第 26代细胞起始接种细胞数为 1.SX 10‘个细胞,群体倍增时间为25.7小时,第45代起始接种细胞数为10‘个细胞,群体倍增时间为39.6小时。CSEC2 细胞系的分裂指数高峰为 44%,细胞数大于扣个的平板克隆形成率为 14%,不能在软琼脂培养基上形成克隆。24小时贴壁率为90%以上,第8代细胞接种率为74%。在含5%、2%血请的培养基中生长良好,但不能在无血清培养基中生长。细胞周期中G广G;期细胞占77.3%,S期占18.9%,GZ+M期占3.8%。③异种移植:CSEC毛 细胞系能在双免疫缺陷的SCid ’J\鼠皮下形成移植瘤,移植瘤结的病理形态与原发肿瘤一致,均为分化较高的鳞状细胞癌。电镜下移植瘤细胞异形性明显,胞浆内可见丰富的张力原纤维束,细胞间桥粒丰富。免疫组织化学染色表明移植瘤结CK表达强阳性。④蛋白标记:CSEC呕 的细胞爬片CK表达强阳性,原发食管癌及3细胞爬片p53、HPV表达阳性。3 CSEC-二15的?……   
[关键词]:食管肿瘤;细胞系;细胞遗传学;染色体异常
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:汕头大学2002年