手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

玉米矮花叶病病原鉴定、检测及外壳蛋白基因变异研究

蒋军喜

  1.浙江玉米矮花叶病病原鉴定从杭州田间表现典型花叶症的玉米病叶中得到病毒分离物ZJ1。以玉米作为病毒繁殖寄主,从中提取到大量线状病毒,病毒粒子大小约740×14nm;病叶组织中观察到大量风轮状内含体及片层聚集体;外壳蛋白亚基分子量大小约33kDa;用甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic viru,SCMV)、玉米矮花叶病毒(Maize dwarf mosaic virus,MDMV)、高粱花叶病毒(Sorghum mosaic virus,SrMV)、约翰逊草花叶病毒(Johnsongrass mosaic virus,JGHV)等4种侵染禾本科的Potyvirus病毒特异性引物,对ZJ1进行RT-PCR扩增,结果用SCMV特异性引物扩增到l条长约0.8kb的DNA片段,经序列测定,片段山781个核苷酸(nt)组成,编码260个氨基酸(aa),序列覆盖近全长CP基因区。比较氨基酸序列同源性,发现该序列与SCMV的同源性最高,达97.8%;与MDMV、SrMV、JGUV等3种病毒的同源性相对较低,分别只有78.8%,73.8%和60.6%。根据马铃薯Y病毒科(Potyviridae)病毒种类和株系划分的标准,将ZJ1鉴定为SCMV。2.甘蔗花叶病毒单克隆抗体制备及检测研究利用SCMV ZJ1分离物提纯病毒粒子作为抗原免疫BAL B/C小鼠,获得2B5、2E8、3E6等3株单克隆抗体(MAbs)。经间接ELISA方法测定,3株单克隆抗体腹水的效价在1:32000-1:2048000之间;3株单克隆抗体只与SCMV不同分离物发生反应,与玉米粗缩病毒(MRDV)、高梁花叶病毒(SrMV)、马铃薯A病毒(PVA)、小麦黄花叶病毒(WYMV)、西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)、菜豆普通花叶病毒(BCMV)、芜青花叶病毒(TuMV)等7种病毒不发生反应;选择2B5单克隆抗体进行检测灵敏度的测定,结果病叶检测灵敏度为1:10240,提纯病毒检测灵敏度为0.7 ng。表明,2B5单克隆抗体可用于SCMV特异性检测。3.我国12省市玉米矮花叶病病原的检测鉴定用SCMV浙江分离物(ZJ1)制备的2E5单克隆抗体对浙江杭州、浙江海宁、江苏南京、江苏东台、上海、山东泰安、河南郑州、河北保定、北京、山西太原、山西榆次、陕西杨凌、甘肃兰州、四川成都、云南昆明等12省市15地点的176株玉米矮花叶病样进行了间接ELISA检测,结果全部样品呈阳性反应。从各样品点分别选取3株代表性样品,采mIC-RT-PCR方法分别进行 SCMV、MDMV、SrM\,。几MV等。1种病毒特异性扩增,结果从全部样品中均能扩增到札MV特异性片段,而用其他3种病毒特异性引物不能扩增出任何片段。综合单抗检测和IC-RI”-PCR检测结果,认为我囚[“大地区发生的玉米矮花叶病山SCMV引起,且不存在与其他3种病毒的混合侵染。4.我国门省市侵染玉米的 SCgr分离物外壳蛋白基因变异与进化测定了我国门省市14个SCMV玉米分离物和1个高粱红条病原山西分离物近全长CP序列,比较了序列 led源性,结果表明15个分离物呈现出两组间的序列芹并,浙江、江苏、卜5每、山习二、河南、河北、山西、陕西等8省市11个玉米分i’t\5物具有极相似的序列,妆灯酸序列P]源性为98.8-99.sfyU,氨基酸序列同源性为 98.l]0096;村肃、凹)]】、云南等省的 3个玉米分焉物及山西的 1个高粱分离物具有较一致的序列,核什酸序列同源性为94.5-99.6%,氨基酸序列同源性为99.2-100%,两组分离物之问的近全长CP核昔酸序列同源性仅为90%人右,氨基酸序列同源性为97%人h。我闷SC\1\分离物与欧洲分离物门’亲缘关系较近,与美囚、澳大利亚、南非分离物C!‘亲缘关系较远。5甘蔗花叶病毒致病性测定对SCM\分离物Zj]和* 在13个玉米品种上进行了致病性测定,接种GS的植株比接种Z刀的植株发病早、病害重、体内病毒浓度高,表明GS对石米的致病性要强于ZJ。筛选到5个高抗GS和ZJ的玉米品种,分别为白玉糯2、苏玉糯1、苏玉糯 2、3.t南花秆糯、农大10s。……   
[关键词]:玉米矮花叶病;甘蔗花叶病毒;单克隆抗体;致病性;间接ELISA;检测;外壳蛋白变异;免疫捕获反转录PCR(IC-RT-PCR)
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:浙江大学2002年